ワクチン後遺症:可視化実験で原因が明らかに
SARS-CoV-2スパイクがDNA損傷修復を阻害し、V(D)J組み換えを抑制することをin vitroで確認した。
Hui Jiang, Ya-Fang Mei
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アブストラクト
重症急性呼吸器症候群コロナウイルス2（SARS-CoV-2）は，コロナウイルス感染症2019（COVID-19）のパンデミックを引き起こし，公衆衛生と世界経済に深刻な影響を与えている。適応免疫は、SARS-CoV-2感染症との戦いにおいて重要な役割を果たしており、患者の臨床転帰に直接影響します。しかし、SARS-CoV-2が適応免疫を阻害するメカニズムはまだ明らかになっていない。今回、我々は、SARS-CoV-2のスパイクタンパク質が、適応免疫におけるV(D)J組み換えの有効性に必要なDNA損傷修復を著しく阻害することを、in vitroの細胞株を用いて報告した。そのメカニズムは、スパイクタンパク質が核内に局在し、DNA修復の鍵となるタンパク質であるBRCA1と53BP1の損傷部位へのリクルートを阻害することで、DNA損傷修復を阻害することを明らかにした。今回の結果は、スパイクタンパク質が適応免疫を阻害する潜在的な分子メカニズムを明らかにするとともに、完全長のスパイクを用いたワクチンの潜在的な副作用を強調するものである。
キーワードSARS-CoV-2, スパイク, DNA損傷修復, V(D)J組み換え, ワクチン
1.はじめに
重症急性呼吸器症候群コロナウイルス2（SARS-CoV-2）は，230万人以上の死者を出しているコロナウイルス感染症2019（COVID-19）の原因ウイルスである。SARS-CoV-2は、構造タンパク質と非構造タンパク質からなるエンベロープ型シングルポジティブセンスRNAウイルスです[1]。感染後，これらのウイルスタンパク質は，宿主の細胞機構をハイジャックして制御不能にし，子孫ウイルスを複製，組み立て，拡散させる [2]．最近の臨床研究では、SARS-CoV-2感染がリンパ球の数と機能に特別な影響を与えることが示されている[3,4,5,6]。軽度および中等度の生存者と比較して、重度のCOVID-19患者は、総T細胞数、ヘルパーT細胞数、サプレッサーT細胞数が有意に少ないことが明らかになっている[3,4]。さらに、COVID-19では、症状が出てからIgGおよびIgMのレベルが遅れています[5,6]。これらの臨床観察結果を総合すると、SARS-CoV-2が適応免疫系に影響を与えていることが示唆される。しかし、SARS-CoV-2が適応免疫を抑制するメカニズムはまだ不明である。
免疫系とDNA修復系は，高等生物が多様な脅威から身を守り，組織の恒常性を維持するために必要な，重要な監視システムである。この2つのシステムは、特にリンパ球の発生と成熟の過程において、相互に依存していることが明らかになっている[7]。主要な二本鎖DNA切断（DSB）修復経路の1つである非相同末端結合（NHEJ）修復は、リンパ球特異的な組換え活性化遺伝子エンドヌクレアーゼ（RAG）を介したV(D)J組換えにおいて重要な役割を果たしており、その結果、B細胞では抗体、T細胞ではT細胞受容体（TCR）のレパートリーが非常に多様化している[8]。例えば、ATM、DNA-PKcs、53BP1などの主要なDNA修復タンパク質の機能が失われると、NHEJ修復に不具合が生じ、機能的なB細胞やT細胞の産生が阻害され、免疫不全に陥ります[7,9,10,11]。一方、ウイルス感染は、通常、活性酸素種（ROS）の産生や宿主細胞の複製ストレスの誘導など、さまざまなメカニズムでDNA損傷を引き起こす[12,13,14]。DNA損傷が適切に修復されなければ、ウイルス感染によって誘発される病態の増幅に寄与することになる。そこで我々は、SARS-CoV-2タンパク質がDNA損傷修復システムをハイジャックし、それによってin vitroでの適応免疫に影響を与えるかどうかを調べることを目的とした。
2.材料と方法
2.1.抗体および試薬
DAPI（Cat #MBD0015）、ドキソルビシン（Cat #D1515）、H2O2（Cat #H1009）、β-tubulin抗体（Cat #T4026）はSigma-Aldrich社から購入した。Hisタグ(Cat #12698)、H2A(Cat #12349)、H2A.X(Cat #7631)、γ-H2A.X(Cat #2577)、Ku80(Cat #2753)、Rad51(Cat #8875)に対する抗体は、Cell Signaling Technology (Danvers, MA, USA)から購入した。53BP1(Cat #NB100-304)およびRNF168(Cat #H00165918-M01)抗体は、Novus Biologicals(Novus Biologicals, Littleton, CO, USA)から入手した。Lamin B（Cat #sc-374015）、ATM（Cat #sc-135663）、DNA-PK（Cat #sc-5282）、BRCA1（Cat #sc-28383）の各抗体は、Santa Cruz Biotechnology（Santa Cruz, CA, USA）から購入した。XRCC4(Cat #PA5-82264)抗体はThermo Fisher Scientific (Waltham, MA, USA)から購入した。
2.2.プラスミド
pHPRT-DRGFPおよびpCBASceIは，Maria Jasinから寄贈された（Addgene plasmid #26476および#26477）[15]．pimEJ5GFPはJeremy Starkから寄贈された（Addgene plasmid #44026）[16]．NSP1, NSP9, NSP13, NSP14, NSP16, スパイクおよびヌクレオカプシドタンパク質は，まずコドン最適化を行って合成し，C末端に6xHisタグを付けて哺乳類発現ベクターpUC57にクローニングした。また，V(D)Jレポーターベクター用に，12スペーサーのRSS-GFP逆相補鎖配列-23スペーサーのRSSを合成した。この配列をpBabe-IRES-MRFPベクターにクローニングし，pBabe-12RSS-GFPi-23RSS-IRES-MRFPレポーターベクターを作製した。12-スペーサーRSS配列。5′-cacagtgctacagactggaacaaaaacc-3′．23-スペーサーRSS配列．5′-cacagtggtagtactccactgtctggctgtacaaaaacc-3′。RAG1およびRAG2の発現コンストラクトは，Martin Gellert氏から惜しみなく提供された（Addgene plasmid #13328および#13329）[17]．
2.3.細胞および細胞培養
ATCC（American Type Culture Collection）から入手したHEK293T細胞およびHEK293細胞を、10％（v／v）ウシ胎児血清（FCS、Gibco）、1％（v／v）ペニシリン（100IU／mL）、およびストレプトマイシン（100μg／mL）を含むダルベッコ改変イーグル培地（DMEM、高グルコース、GlutaMAX）（Life Technologies、Carlsbad、CA、USA）中、37℃で5％CO2下で培養した。HEK293T-DR-GFPおよびHEK293T-EJ5-GFPレポーター細胞は、前述の方法で作製し、5％CO2下、37℃で上記の培養液を用いて培養した。
2.4.HRおよびNHEJレポーターアッセイ
HEK293T細胞におけるHRおよびNHEJ修復は、DR-GFPおよびEJ5-GFP安定細胞を用いて前述のように測定した。0.5×106個のHEK293T安定レポーター細胞を6ウェルプレートに播き、2μgのI-SceI発現プラスミド(pCBASceI)とSARS-CoV-2タンパク質発現プラスミドを一緒にトランスフェクトした。トランスフェクションおよびアスピリン処理の48時間後に細胞を採取し、フローサイトメトリー分析によりGFPの発現を解析した。平均値は3回の独立した実験から得られたものである。
2.5.細胞の分画とイムノブロッティング
細胞分画のアッセイには，メーカーの説明書に従ってSubcellular Protein Fractionation Kit（Thermo Fisher社）を使用した。BCA試薬（Thermo Fisher Scientific, Rockford, IL, USA）を用いてタンパク質ライセートを定量した。ドデシル硫酸ナトリウム-ポリアクリルアミドゲル電気泳動（SDS-PAGE）でタンパク質を分解し，ニトロセルロース膜（Amersham protran, 0.45μm NC）に転写し，特異的な一次抗体とHRP標識二次抗体を用いてイムノブロットした。タンパク質のバンドは，SuperSignal West Pico or Femto Chemiluminescence kit (Thermo Fisher Scientific)を用いて検出した。
2.6.コメットアッセイ
細胞をさまざまなDNA損傷試薬で処理した後、指示した時点で採取して分析した。細胞（冷やしたリン酸緩衝生理食塩水[PBS]で1×105細胞/mL）を40℃で1%低融点アガロースに1:3 vol/volの割合で再懸濁し、コメットスライドにピペッティングした。その後、あらかじめ冷やしておいた溶解バッファー（1.2 M NaCl, 100 mM EDTA, 0.1% Sodium lauryl sarcosinate, 0.26 M NaOH pH > 13）に浸し、4℃の暗所で一晩（18-20時間）溶解させた。その後、スライドを注意深く取り出し、リンスバッファー（0.03M NaOHおよび2mM EDTA、pH > 12）に室温（RT）で20分間、暗所で浸した。この洗浄ステップを2回繰り返した。スライドをリンスバッファーを含む水平電気泳動室に移し、0.6V/cmの電圧で25分間分離した。最後に、スライドを蒸留水で洗浄し、10μg/mLのヨウ化プロピジウムで染色し、蛍光顕微鏡で分析した。各サンプルの約100個の細胞を含む20フィールドを評価し、フィジーのソフトウェアを使って定量化し、テールの長さ（テールモーメント）を決定した。
2.7.免疫蛍光
12ウェルプレートのガラスカバースリップ上に細胞を播種し、指示したプラスミドで24時間トランスフェクションした後、実験設定に従ってDNA損傷試薬を用いて、または用いずに処理した。細胞をPBSに溶解した4％パラホルムアルデヒド（PFA）で20分間固定した後、0.5％ Triton X-100で10分間透過させた。スライドを5％正常ヤギ血清（NGS）でブロッキングし、1％NGSで希釈した一次抗体と4℃で一晩インキュベートした。その後、1% NGSで希釈したAlexa Fluor 488または555（Invitrogen社）で標識した指示の二次抗体とRTで1時間インキュベートし、その後、DAPIでRTで15分間染色した。カバースリップをDako Fluorescence Mounting Medium（Agilent）を用いてマウントし，Nikon共焦点顕微鏡（Eclipse C1 Plus）を用いて画像化した。すべてのスコアリングは、ブラインド条件で行った。
2.8.V(D)Jリコンビネーションの解析
V(D)Jレポータープラスミドには，逆GFPと，連続的に発現するRFPを駆動するIRESが含まれている。継続的に発現するRFPは内部トランスフェクションコントロールである。組換え活性化遺伝子1/2(RAG1/2)を細胞に共導入すると、RAG1/2がRSSを切断してDSBの誘導を仲介し、V(D)J組換えが起こると、逆GFPはNHEJ修復により正順にライゲーションされます。そして、細胞は機能的なGFPを発現することになる。つまり、GFPとRFPの二重陽性細胞がV(D)Jレポーターアッセイのリードアウトとなるわけだ[18]。70%コンフルエントになった293T細胞に，V(D)J GFPレポーターを単独で（バックグラウンド），あるいはRAG1およびRAG2発現コンストラクトと組み合わせて，1 µg V(D)J GFPレポーター：0.5 µg RAG1：0.5 µg RAG2の割合でトランスフェクトした。翌日、培地を交換し、さらに48時間後に細胞を採取し、フローサイトメトリーでGFPとRFPの発現を解析した。
2.9.統計解析
すべての実験は、独立して収集または準備したサンプルを用いて少なくとも3回繰り返した。データは，GraphPad 8を用いて，Student's t testまたはANOVAとTukey's multiple-comparison testにより解析した。
3.結果
3.1.核内に局在するSARS-CoV-2ウイルスタンパク質のDNA損傷修復への影響
DNA損傷修復は、ゲノムの安定性を確保するために主に核内で行われる。SARS-CoV-2のタンパク質は細胞質で合成されるが[1]、Nsp1, Nsp5, Nsp9, Nsp13, Nsp14, Nsp16など、いくつかのウイルスタンパク質は核内でも検出される[19]。我々は，これらの核内に局在するSARS-CoV-2タンパク質が，宿主細胞のDNA損傷修復システムに影響を与えるかどうかを調べた．そこで，これらのウイルスタンパク質の発現プラスミドと，一般的に細胞質に局在するタンパク質と考えられているスパイクや核タンパク質の発現プラスミドを一緒に構築した．これらのタンパク質の発現と局在を、免疫ブロット法と免疫蛍光法によって確認した（図1Aと図S1A）。Nsp1，Nsp5，Nsp9，Nsp13，Nsp14，Nsp16は確かに核に局在しており，核タンパク質は主に細胞質に局在していることが判明した。意外なことに、スパイクタンパク質は核に豊富に存在することがわかった（図1A）。NHEJ修復と相同組換え（HR）修復は、2つの主要なDNA修復経路であり、ゲノムの完全性を継続的に監視・確保するだけでなく、適応免疫細胞の機能にも不可欠である[9]。これらのウイルスタンパク質がDSB修復経路を阻害しているかどうかを評価するために，HRとNHEJのレポーターシステムとして，direct repeat-green fluorescence protein（DR-GFP）とtotal-NHEJ-GFP（EJ5-GFP）をそれぞれ用いて，I-SceIエンドヌクレアーゼによって誘導された部位特異的DSBの修復を調べた[15,16]．Nsp1，Nsp5，Nsp13，Nsp14，スパイクタンパク質を過剰発現させると，HRとNHEJの両方の修復の効率が低下した（図1B-E，図S2A,B）。さらに、Nsp1、Nsp5、Nsp13、Nsp14を過剰発現させると、他のタンパク質に比べて増殖が劇的に抑制されることもわかった（図S3A,B）。したがって、Nsp1、Nsp5、Nsp13、Nsp14によるDNA損傷修復の抑制効果は、成長停止や細胞死などの二次的な作用によるものと考えられる。興味深いことに、スパイクタンパク質を過剰発現させても、細胞の形態や増殖には影響を与えないが、HR修復とNHEJ修復の両方が有意に抑制された（図1B-E、図S2A,BおよびS3A,B）。
3.2.SARS-CoV-2のスパイクタンパク質はDNA損傷修復を阻害する
スパイクタンパク質は、ウイルスが宿主細胞に侵入する際に重要な役割を果たしており、ほとんどのワクチン戦略の焦点となっている[20,21]。そこで我々は、DNA損傷修復とそれに伴うV(D)J組み換えにおけるスパイクタンパク質の役割をさらに調査した。スパイクタンパク質は、通常、粗面小胞体（ER）上で合成されると考えられている[1]。スパイクタンパク質は、グリコシル化などの翻訳後修飾を受けた後、他のウイルスタンパク質とともに細胞膜装置を介して輸送され、成熟したビリオンを形成する[1]。スパイクタンパク質には，S1とS2という2つの主要なサブユニットのほか，いくつかの機能ドメインやリピートが存在する[22]（図2A）。スパイクタンパク質は，本来，不活性な完全長のタンパク質として存在する．ウイルス感染時には，宿主細胞のプロテアーゼであるフリンプロテアーゼがSタンパク質をS1とS2のサブユニットに切断して活性化し，これがウイルスの標的細胞への侵入に必要となる[23]。さらに，DNA修復阻害に必要な機能的特徴を明らかにするため，スパイクタンパク質のさまざまなサブユニットを調べた。その結果、完全長のスパイクタンパク質だけが、NHEJとHRの両方の修復を強く阻害した（図2B-Eおよび図S4A,B）。次に、スパイクタンパク質がDSB修復を阻害することでゲノムの不安定性に直接寄与しているかどうかを調べた。コメットアッセイを用いてDSBのレベルをモニターした。γ線照射、ドキソルビシン処理、H2O2処理など、さまざまなDNA損傷処理を行ったところ、スパイクタンパク質の存在下では修復が少なくなった（図2F,G）。これらの結果から、スパイクタンパク質が核内のDNA修復に直接影響を与えることが明らかになった。
3.3.スパイクタンパク質は、DNA損傷修復チェックポイントタンパク質の採用を阻害する
スパイクタンパク質が核内に存在することを確認するため、細胞内のサブセルラー画分解析を行ったところ、スパイクタンパク質は細胞膜画分に豊富に存在するだけでなく、核内の画分にも豊富に存在し、クロマチン結合画分でも検出可能な発現量であった（図3A）。また、スパイクには3つの異なる形態があることを確認した。上のバンドは高度にグリコシル化されたスパイク、中のバンドは完全長のスパイク、下のバンドは切断されたスパイクのサブユニットである。また、コメットアッセイと同様に、DNA損傷マーカーであるγ-H2A.Xの発現が、DNA損傷条件下でスパイクタンパク質を過剰発現させた細胞で確認された（図3B）。最近の研究では，スパイクタンパク質が小胞体ストレスと小胞体関連タンパク質の分解を誘導することが示唆されている[24]。スパイクタンパク質がDNA修復タンパク質の分解を促進することでDNA修復を阻害している可能性を排除するために、NHEJおよびHR修復経路に必須のいくつかのDNA修復タンパク質の発現を確認したところ、これらのDNA修復タンパク質はスパイクタンパク質の過剰発現後も安定していた（図3C）。スパイクタンパク質がNHEJとHRの両方の修復経路を阻害する仕組みを明らかにするために、HRとNHEJの修復にそれぞれ重要なチェックポイントタンパク質であるBRCA1と53BP1のリクルートを解析した。その結果、スパイクタンパク質は、BRCA1と53BP1の両方の会合形成を顕著に阻害することがわかった（図3D-G）。これらのデータを総合すると、SARS-CoV-2の完全長スパイクタンパク質は、DNA修復タンパク質のリクルートを阻害することで、DNA損傷修復を阻害することがわかる。
3.4.スパイクタンパク質がV(D)Jリコンビネーションを阻害するin vitro
DNA損傷修復、特にNHEJ修復は、B細胞やT細胞の免疫の核心であるV(D)J組み換えに不可欠である[9]。現在までに、mRNAワクチンやアデノウイルス-COVID-19ワクチンなど、承認されている多くのSARS-CoV-2ワクチンは、完全長のスパイクタンパク質に基づいて開発されている[25]。SARS-CoV-2がリンパ球前駆体に直接感染するかどうかは議論の余地があるが[26,27]、感染した細胞がエクソソームを分泌し、SARS-CoV-2のRNAやタンパク質を標的細胞に送達できることを示す報告もある[28,29]。さらに，スパイクタンパク質がNHEJを介したV(D)J組み換えを減少させるかどうかを検証した．そのために，以前の研究[18]に従って，in vitro V(D)J組換えレポーターシステムを設計した（図S5）．空のベクターと比較して，スパイクタンパク質を過剰発現させると，このin vitroレポーターシステムにおいてRAGを介したV(D)J組み換えが阻害された（図4）。
4.ディスカッション
今回の研究では、スパイクタンパク質がDNA損傷修復機構や適応免疫機構をハイジャックしていることが明らかになった。我々は、スパイクタンパク質がDNA損傷修復を阻害することによって適応免疫を損なう可能性のあるメカニズムを提案する。SARS-CoV-2が胸腺細胞や骨髄リンパ系細胞に感染するという証拠は発表されていないが、in vitroのV(D)Jレポーターアッセイでは、スパイクタンパク質がV(D)J組み換えを激しく阻害していた。我々の結果と一致するように、臨床観察でもCOVID-19による重症化や死亡のリスクは年齢とともに増加し、特に高齢者が最もリスクが高いことが示されている[22]。これは、SARS-CoV-2のスパイクタンパク質が高齢者のDNA修復システムを弱め、その結果、V(D)J組み換えや適応免疫を阻害するためであると考えられる。対照的に、我々のデータは、DNA損傷修復におけるスパイクタンパク質サブユニットの関与に関する貴重な詳細を提供しており、完全長スパイクベースのワクチンがB細胞におけるV(D)Jの組み換えを阻害する可能性を示している。これは、完全長スパイクベースのワクチンがRBDベースのワクチンと比較して低い抗体価を誘導するという最近の研究とも一致する[28]。このことは、スパイクの抗原性エピトープをSARS-CoV-2ワクチンとして使用することは、全長スパイクよりも安全で効果的である可能性を示唆している。以上のように、我々はSARS-CoV-2が宿主の適応免疫機構を抑制する重要なメカニズムの1つを明らかにした。さらに、今回の発見は、全長スパイクを用いたワクチンの潜在的な副作用も示唆している。今回の研究は、COVID-19の病原性に関する理解を深めるとともに、より効率的で安全なワクチンを設計するための新たな戦略を提供するものである。
補足資料
以下はオンラインで
、図S1：核に局在するSARS-CoV-2タンパク質のヒト細胞での発現、図S2：核に局在するSARS-CoV-2タンパク質のNHEJ-およびHR-DNA修復経路への影響、図S3:Nsp1, Nsp5, Nsp13, Nsp14は細胞増殖を抑制するが、スパイクは抑制しない、図S4:SARS-CoV-2のスパイク変異体がNHEJ-およびHR-のDNA修復経路に及ぼす影響、図S5：in vitro V(D)J組み換えアッセイ。
著者の寄稿
H.J.は本研究の構想と設計を行った。H.J.とY.-F.M.は研究を監督し、実験を行い、データを解釈した。執筆-原案作成：H.J.; 執筆-査読・編集：H.J. and Y.-F.M.; 資金調達：Y.-F.M. 全著者が本稿の公開版を読み、同意した。
資金調達
本研究は，ウメオ大学医学部のCOVID-19に対する企画助成金（研究プロジェクト番号：3453 16032 to Y.F.M.），ウメオ大学ライオン癌研究財団（助成金：LP 17-2153，AMP 19-982，LP 20-2256 to Y.F.M.），北部医療地域の学術医療機関および大学医療機関での研究に対する拠点ユニットのALF基金（ALF-Basenheten：2019, 2020, 2021 to Y.F.M.）の支援を受けた。
機関審査委員会の声明
本研究は、人や動物を対象としていないため、該当しません。
インフォームド・コンセントについて
本研究はヒトを対象としていないため、該当しません。
データ提供に関する声明
本研究で発表されたデータは、本文および補足資料に掲載されています。
利害の衝突
著者らは，競合する利益が存在しないことを宣言している。資金提供者は，研究デザイン，データ収集・解析，発表の決定，原稿作成のいずれにも関与していない。
脚注
出版社注：MDPIは、出版された地図や所属機関における管轄権の主張に関しては中立を保つ。
記事情報
Viruses.2021 Oct; 13(10): 2056.
オンラインで2021年10月13日に公開。 doi: 10.3390/v13102056
PMCID：PMC8538446
PMID:34696485
Hui Jiang1,2,*とYa-Fang Mei2,*。
オリバー・シルドゲン（学術編集者
1Department of Molecular Biosciences, The Wenner-Gren Institute, Stockholm University, SE-10691 Stockholm, Sweden（ストックホルム大学、分子生物学部門
2Department of Clinical Microbiology, Virology, Umeå University, SE-90185 Umeå, Sweden
*Correspondence: es.us@gnaij.iuh (H.J.); es.umu@iem.gnaf-ay (Y.-F.M.)
Received 2021 Aug 20; Accepted 2021 Oct 8.
Copyright © 2021 by the authors.
Licensee MDPI, Basel, Switzerland.この論文は、Creative Commons Attribution（CC BY）ライセンス（https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/）の条件に基づいて配布されるオープンアクセス論文です。
Virusesの記事は、Multidisciplinary Digital Publishing Institute (MDPI)の好意により提供されています。
リファレンス
1.V'Kovski P., Kratzel A., Steiner S., Stalder H., Thiel V. コロナウイルスの生物学と複製。SARS-CoV-2の意味するところ。Nat.Rev. Microbiol.2021;19:155-170. doi: 10.1038/s41579-020-00468-6.[PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]を参照してください。
2.Suryawanshi R.K., Koganti R., Agelidis A., Patil C.D., Shukla D. D. Dysregulation of Cell Signaling by SARS-CoV-2.Trends Microbiol.2021;29:224-237. doi: 10.1016/j.tim.2020.12.007.[PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]を参照してください。
3.Qin C., Zhou L., Hu Z., Zhang S., Yang S., Tao Y., Xie C., Ma K., Shang K., Wang W., et al. 中国・武漢のコロナウイルス2019（COVID-19）患者における免疫反応の調節不全。Clin.Infect.Dis.2020;71:762-768. doi: 10.1093/cid/ciaa248.[PMCフリー記事] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]を参照してください。
4.Wang F., Nie J., Wang H., Zhao Q., Xiong Y., Deng L., Song S., Ma Z., Mo P., Zhang Y.COVID-19肺炎における末梢リンパ球サブセットの変化の特徴.J. Infect.Dis.2020;221:1762-1769. doi: 10.1093/infdis/jiaa150.[PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]を参照してください。
5.Zhang G., Nie S., Zhang Z. コロナウイルス感染症患者における重症急性呼吸器症候群コロナウイルス2抗体の経時的変化 2019.J. Infect.Dis.2020;222:183-188. doi: 10.1093/infdis/jiaa229.[PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]を参照してください。
6.Long Q.X., Liu B.Z., Deng H.J., Wu G.C., Deng K., Chen Y.K., Liao P., Qiu J.F., Lin Y., Cai X.F., et al. COVID-19患者におけるSARS-CoV-2への抗体反応.Nat.Med.2020;26:845-848. doi: 10.1038/s41591-020-0897-1.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]を参照してください。
7.Bednarski J.J., Sleckman B.P. リンパ球の発生。DNA 損傷応答シグナルの統合。Adv. Immunol.2012;116:175-204.[PMC free article] [PubMed] [Google Scholar].
8.マル・S・マルシェッティ・V・フランシス・D・コルテス・P・V(D)J組換えにおける非相同末端接合の役割。Immunol.Res. 2012;54:233-246. doi: 10.1007/s12026-012-8329-z.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]を参照してください。
9.ベドナルスキ J.J., スレックマン B.P. At the intersection of DNA damage and immune responses.Nat.Rev. Immunol.2019;19:231-242. doi: 10.1038/s41577-019-0135-6.[PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar].
10.Gapud E.J., Sleckman B.P. Unique and redundant functions of ATM and DNA-PKcs during V(D)J recombination（V(D)J組換えにおけるATMとDNA-PKcsのユニークで冗長な機能）。Cell.Cycle.2011;10:1928-1935. doi: 10.4161/cc.10.12.16011.[PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar].
11.このように、53BP1はV(D)J組換えの際に長距離のDNA末端結合を促進します。Nature.2008;456:529-533. doi: 10.1038/nature07476.[PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar].
12.Schwarz K.B. ウィルス感染時の酸化ストレス:A review.Free Radic.Biol.Med.1996;21:641-649. doi: 10.1016/0891-5849(96)00131-1.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar].
13.Xu L.H., Huang M., Fang S.G., Liu D.X. コロナウイルスの感染は、その非構造タンパク質13とDNAポリメラーゼデルタのp125サブユニットとの相互作用を介して、DNA複製ストレスを誘導することを明らかにした。J. Biol.Chem.2011;286:39546-39559. doi: 10.1074/jbc.M111.242206.[PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar].
14.Delgado-Roche L., Mesta F. Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus (SARS-CoV) Infection の Key Player としての酸化ストレス.Arch.Med.Res. 2020;51:384-387. doi: 10.1016/j.arcmed.2020.04.019.[PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]を参照してください。
15.Pierce A.J., Hu P., Han M., Ellis N., Jasin M. Ku DNA end-binding protein modulates homologous repair of double-strand break in mammalian cells.Genes Dev.2001;15:3237-3242. doi: 10.1101/gad.946401.[PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar].
16.Bennardo N., Cheng A., Huang N., Stark J.M. オルターナティブNHEJは、哺乳類の染色体切断修復の機構的に異なる経路である。PLoS Genet.2008;4:e1000110. doi: 10.1371/journal.pgen.1000110.[PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar].
17.変異した RAG-1 タンパク質の発現と V(D)J 組換え活性．Nucleic Acids Res. 1993;21:5644-5650. doi: 10.1093/nar/21.24.5644.[PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar].
18.Trancoso I., Bonnet M., Gardner R., Carneiro J., Barreto V., Demengeot J., Sarmento L. A Novel Quantitative Fluorescent Reporter Assay for RAG Targets and RAG Activity.Front.Immunol.2013;4:110. doi: 10.3389/fimmu.2013.00110.[PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar].
19.SARS-CoV-2タンパク質の細胞内局在化についての系統的・分子的研究（A systemic and molecular study of subcellular localization of SARS-CoV-2 proteins）．Signal Transduct.Target.Ther.2020;5:269. doi: 10.1038/s41392-020-00372-8.[PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]を参照してください。
20.20.Shang J., Wan Y., Luo C., Ye G., Geng Q., Auerbach A., Li F.SARS-CoV-2の細胞侵入メカニズム。Proc.Natl. Acad.Sci. USA.2020;117:11727-11734. doi: 10.1073/pnas.2003138117.[PMCフリー記事] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar].
21.Du L., He Y., Zhou Y., Liu S., Zheng B.J., Jiang S. The spike protein of SARS-CoV-A target for vaccine and therapeutic development.Nat.Rev. Microbiol.2009;7:226-236. doi: 10.1038/nrmicro2090.[PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar].
22.Huang Y., Yang C., Xu X.F., Xu W., Liu S.W. SARS-CoV-2 スパイクタンパク質の構造的・機能的特性。COVID-19の抗ウイルス剤開発の可能性。Acta Pharmacol.Sin.2020;41:1141-1149. doi: 10.1038/s41401-020-0485-4.[PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]を参照してください。
23.Hoffmann M., Kleine-Weber H., Schroeder S., Kruger N., Herrler T., Erichsen S., Schiergens T.S., Herrler G., Wu N.H., Nitsche A., et al. SARS-CoV-2の細胞侵入はACE2とTMPRSS2に依存し、臨床的に証明されているプロテアーゼ阻害剤によってブロックされる.Cell.2020;181:271-280.e8. doi: 10.1016/j.cell.2020.02.052.[PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar].
24.Hsu A.C.-Y., Wang G., Reid A.T., Veerati P.C., Pathinayake P.S., Daly K., Mayall J.R., Hansbro P.M., Horvat J.C., Wang F., et al,et al. SARS-CoV-2 Spike protein promotes hyper-inflammatory response that can be ameliorated by Spike-antagonistic peptide and FDA-approved ER stress and MAP kinase inhibitors in vitro. bioRxiv. 2020;2020:317818.[Google Scholar]を使用しています。
25.Poland G.A., Ovsyannikova I.G., Kennedy R.B. SARS-CoV-2の免疫。Review and applications to phase 3 vaccine candidates.Lancet.2020;396:1595-1606. doi: 10.1016/S0140-6736(20)32137-1.[PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]を参照してください。
26.Davanzo G.G., Codo A.C., Brunetti N.S., Boldrini V., Knittel T.L., Monterio L.B., de Moraes D., Ferrari A.J.R., de Souza G.F., Muraro S.P., et al. SARS-CoV-2 Uses CD4 to Infect T Helper Lymphocytes. medRxiv. 2020;2020:20200329.[Google Scholar]を参照してください。
27.Borsa M.、Mazet J.M.Attacking the defence:SARS-CoV-2は免疫細胞に感染できる。Nat.Rev. Immunol.2020;20:592. doi: 10.1038/s41577-020-00439-1.[PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]を参照してください。
28.Barberis E., Vanella V.V., Falasca M., Caneapero V., Cappellano G., Raineri D., Ghirimoldi M., De Giorgis V., Puricelli C., Vaschetto R., et al. 循環するエクソソームはSARS-CoV-2感染に強く関与している.Front.Mol.Biosci.2021;8:632290. doi: 10.3389/fmolb.2021.632290.[PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar].
29.Sur S., Khatun M., Steele R., Isbell T.S., Ray R., Ray R.B. COVID-19患者からのエクソソームは、遠隔臓器細胞における炎症シグナルの誘発において、tenascin-Cとfibrinogen-βを運ぶ。 bioRxiv. 2021;2021:430369.[PMCフリー記事] [PubMed] [Google Scholar].
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