鉄欠乏が妊娠可能な年齢の女性の腸内細菌叢に及ぼす影響

哉百名




オープンアクセス論文
鉄欠乏が妊娠可能な年齢の女性の腸内細菌叢に及ぼす影響

https://www.mdpi.com/2072-6643/15/3/691

by Hoonhee Seo 1,†,Seug Yun Yoon 2,†ORCID,Asad ul-Haq 1,†ORCID,Sujin Jo 3ORCID,Sukyung Kim 1,Md Abdur Rahim 3,Hyun-A Park 3ORCID,Fatemeh Ghorbanian 3,Min Jung Kim 2,Min-Young Lee 2,Kyoung Ha Kim 2ORCID,Namsu Lee 2,Jong-Ho Won 2,* andHo-Yeon Song 1,3,*.
1
順天郷大学プロバイオティクスマイクロバイオームコンバージェンスセンター、牙山市、31538、韓国
2
順天郷大学ソウル病院内科血液腫瘍科、04401、韓国
3
順天郷大学医学部微生物・免疫学教室、天安市、31151、大韓民国
*
著者への連絡先
†
これらの著者は、この研究に等しく貢献した。
Nutrients 2023, 15(3), 691; https://doi.org/10.3390/nu15030691
Received: 2023年1月7日 / 改訂：2023年1月26日 / 受理：2023年1月27日 / 発行：2023年1月30日
(この記事は、Gut Microbiota in Human Healthに所属しています)
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概要
鉄欠乏性貧血（IDA）は、世界で最も一般的な栄養欠乏症であり、特に生殖年齢の女性において大きなリスクを伴うグローバルな健康問題である。鉄の経口補給は、鉄欠乏症およびIDAに対して最も広く使用され、費用対効果の高い治療法である。しかし、腸炎などの副作用、治療コンプライアンス、バイオアベイラビリティに関する限界があります。近年、これらの問題を克服するために腸内細菌群の特性研究が行われているが、さらなる研究が必要である。このような背景から、IDAに脆弱な若い女性の糞便中の16S遺伝子に関するメタゲノム研究が行われました。健常者16名とIDA患者15名を解析した結果、細菌群集の分布に有意差が確認された。特に、IDA患者では健常者と比較してFaecalibacteriumが有意に減少していることが特徴的であった。さらに、鉄分補給によりIDAから回復した患者では、Faecalibacteriumが有意に正常レベルに回復することが確認された。しかし、β多様性については治療前と比較して有意な差は見られなかった。また、回復者と健常者のβ多様性の結果にも差はなかった。したがって、IDAの改善に伴い、疾患状態における腸内異臭は回復したと考えられる。限られた被験者から得られた結果であり、さらなる研究が必要であるが、本研究の結果は、IDAにおける宿主-微生物間のクロストークに基づく治療・予防戦略開発の基礎となることが期待される。
キーワード：鉄欠乏性貧血（IDA）、次世代シーケンサー（NGS）、腸内マイクロバイオーム、16S rRNA遺伝子ベースメタゲノミクス、ディスバイオーシス、若年女性

  1. はじめに
    鉄欠乏性貧血（Ida）は世界的な健康問題であり、世界で最も一般的かつ典型的な栄養欠乏症と考えられています[1,2]。Global Burden of Disease（GBD）レポートによると、IDAはYears Lived with Disability（YLD）の上位5つの原因の一つであり、最も一般的な10の原因の一つであり、12億4000万人の患者がいるとされている[3,4]。特に発展途上国では、食事摂取量の少なさが、鉄の補給や鉄のバイオアベイラビリティとも関連し、この疾患が流行する原因となっています[5]。
    IDAは、主に栄養失調、食物中の鉄欠乏、鉄の吸収不足、胎盤や胎児による鉄吸収の増加などにより、ヘモグロビンや鉄含有酵素の合成が鉄によって制限された場合に発生します[6,7,8]。元素鉄は、呼吸、DNA複製、エネルギー生産、細胞増殖など、いくつかの基本的な生物学的プロセスに関与している[9]。この鉄が不足すると、体力の低下、呼吸困難、体温調節機能の低下、免疫機能の低下、神経認知機能の低下などを引き起こす可能性があります[1]。さらに、この鉄欠乏によるIDAは、うっ血性心不全や慢性腎臓病を悪化させ [10]、出生前や新生児の健康不良、小児の運動・認知・成長発達の遅れを引き起こします [11,12]。
    鉄欠乏の割合は女性で高く、そのリスクも特に妊娠可能な年齢の女性で高くなります[7,13]。IDAは、月経出血、妊娠、授乳による35カ国の女性のYLD上昇の主要な原因であることが判明しています[4]。これに関して、2019年の貧血は、妊娠中と非妊娠中の女性でそれぞれ36.5%と29.6%でした[16]。IDAは発展途上国や先進国でも普及していますが、低・中所得国の女性でより多く発生し、42.7％が妊娠中に貧血を経験しています[17]。米国では、妊婦の 5.0 ± 0.4% と非妊婦の 2.6 ± 0.7% が IDA であることが分かっており [3] 、ヨーロッパ諸国での数値と同様である [18,19] 。
    鉄塩の経口補給は、鉄欠乏症とIDAを治療する最も一般的で手頃な方法である[20]。しかし、胃腸の副作用や最大50％の患者のコンプライアンス違反によってまだ制限されており、これは腸内細菌叢の性質とそれに関連するバイオアベイラビリティに関連しています[21]。特に、IDAは大腸の消化管に沿ったディスバイオーシスと関連しており [22]、鉄治療も腸内フローラの多様性と構成に影響を与える [23]。しかし、IDAにおける宿主-微生物間のクロストーク研究の報告はまだ黎明期である。
    このような研究背景を考慮すると、IDAにおける腸内細菌叢の特徴を研究し、IDAの予後改善に不可欠な手がかりを得ることが必要である。そこで、本研究では、特にIDAに脆弱な若い女性に焦点を当てました。さらに、IDAの治療において、鉄分補給がヒトの腸内細菌叢にどのような影響を与えるかについては、まだ多くの研究がなされていません。そこで、本研究では、若い女性の健常者とIDA患者の糞便マイクロバイオームも解析し、鉄分補給でIDAから回復した被験者についても調査しました。

  2. 材料と方法
    2.1. 被験者のリクルートとサンプル収集
    本研究では、20歳から50歳までの閉経前女性31名（うちIDA患者15名、健常者16名）を募集した。IDA患者は、WHOの診断基準[24]に従って診断された。対照者は、募集時に健康で病気を患っていないと自己申告した。スクリーニング時には、ヘモグロビン値が12 g/dL以上、フェリチン値が15 ng/mL以上の人のみを対象とした。参加者は、試験実施前の3カ月間に抗生物質や腸内細菌叢に影響を与える他の医療行為を行わなかった。便のサンプリングは、以前に発表されたマニュアル[25]に従って行われた。IDA患者は3〜6ヶ月間、経口（硫酸鉄80mgを含む錠剤を1日2回）または静脈内（ショ糖鉄200mgを繰り返し投与、合計1000〜1500mg）鉄補給を受け、血液検査で貧血が改善したことを確認した。その後、再度サンプリングを実施した。本研究は、公表されている倫理原則[26]に従って実施され、順天郷大学病院の施設審査委員会（IRB番号2020-08-017）の承認を受けた。本研究を実施する前に、すべての被験者が同意書に署名した。
    2.2. 便サンプルからの DNA 抽出
    QIAamp DNA fast Stool Mini Kit (Qiagen, Hilden, Germany)を用いて、便サンプルからDNAを抽出した。次に、Qubit-4蛍光光度計（Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA）を用いて、DNA濃度を測定した。抽出した DNA の品質は 0.8% アガロースゲルでの電気泳動で分析した。すべてのDNAサンプルは、次の実験を行うまで-20℃で保存した。
    2.3. 16S rRNA 遺伝子ベースのメタゲノミクス
    糞便から抽出した細菌 DNA から 16S rRNA 遺伝子の V4 超可変領域を増幅した。PCRは、Veriti 96-well Thermal cycler (Applied Biosystems, Thermo Fisher, Waltham, MA, USA) で、Illumina推奨のアンプリコンPCR条件に従って実施した。別途、各サンプルに対して、各プライマーセット5 µM、鋳型DNA 10 ng、KAPA HiFi HotStart ReadyMix (Kapa Biosystems, Wilmington, MA, USA) およびヌクレフリー水を最終容量25 µLで使用しました。プライマーの情報は以下の通りです。フォワードプライマー：TCGTCGCAGCGTCAGATGTGTATAAGACAG-CCTACGGNGGCWGCAG；リバースプライマー：GTCTCGTGGCTCGGAGATGTGTATAAGACAGGACTACHVGG-GTATCTAATCC。次に、PCR産物を、AMPureビーズ（Beckman Coulter, High Wycombe, UK）を用いて精製した。次に、Nextera XT DNA Library Prep Kit (Illumina, CA, USA) を用いて、精製したPCR産物を用いてインデックスPCRを実施した。その後、インデックスPCR産物を精製し、全てのサンプルを10 mMのTris, pH 8.5で各1 nMに希釈し、各サンプル5 μLを取り、プールして混合した。プールしたライブラリ（50pMol）を30％PhiX（Illumina, CA, USA）と混合し、iSeq 100プラットフォーム（Illumina, CA, USA）でシークエンシングした。
    2.4. 16S rRNA 遺伝子アンプリコンのバイオインフォマティクス解析
    データは、既述の手順[27]に従って解析した。データ処理には、EzBioCloudサーバー（http://www.ezbiocloud.net、2022年12月15日アクセス）を使用した。ここでは、低品質リード（<Q25）の品質評価とフィルタリングにTrimmomatic（バージョン0.32）を利用し、プライマーのトリミングにMyers and Millerのアライメントアルゴリズムを使用した[28]。ソフトウェアプログラムHMMERとnhmmer (package version 3.2.1) を用いて、16S rRNAをコードしていないサンプルを検出した[29]。並行して、VSEARCHのderep_full lengthコマンドを、ユニークリードと重複リードのクラスタに適用した[30]。EzBioCloudの16S rRNAデータベースとVSEARCHは、分類学的な割り当てにも適用された[28,30,31]。キメラリードはUCHIMEでフィルタリングし、cluster_fastコマンドを利用して下位分類レベルの配列を同定し、操作上の分類単位（OTU）を生成しました[30,32]。単一リードのOTUは、さらなる解析のために削除された。
    α多様性解析では、ACE、Chao1、Jackknife、OTUに基づいて種の豊富さを計算し[33,34,35]、NPShannon、Shannon/Simpson、系統的多様性を用いて種の豊かさを解析した[36,37,38]。ベータ多様性距離は、Jenson-Shannon、Bray-Curtis、Generalized UniFrac、UniFrac法に基づいて解析し、PERMANOVA（Permutational Multivariate Analysis of Variance）を用いてグループ間のベータ集合の有意性を評価しました[39,40,41,42]。分類学的バイオマーカーの発見は、LEfSe (Linear discriminant analysis Effect Size) と Kruskal-Wallis H 検定 [43,44] の統計的比較アルゴリズムによって行われた。サンプルの機能プロファイルは、PICRUSt (Phylogenetic Investigation of Communities by Reconstruction of Unobserved States) [45,46] を用いてKEGG (Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes) に基づいて予測された。p 値が 0.05 未満の場合、統計的に有意であることを示す。
    2.5. qRT-PCR 解析
    各試料群のFaecalibacterium属およびFaecalibacterium prausnitzii種の定量を目的として、qRT-PCR解析を実施した。本研究では、以下のプライマーセットを使用した。Faecalibacteriumに特異的なHFB-F3 (GCTTTCAAACTGGTCG) とHFB-R5 (GAAGAAACGTATTTCTAC) 、F. prausnitziiに特異的なFPR-2F (GGAGGAAGAAGGTCTTCGG) とFprau645R (AATTCCGCCTACCTGCACT) [47, 48] 。qRT-PCRは、リアルタイムPCR（CFX connect, BioRad, Hercules, CA, USA) で3連で測定を実施した。各ウェルは、1μLのDNA（5ng）、10μLの2×Syber Green Master mix（BioRad, Hercules, CA, USA）、1μLの各プライマー（2.5μM）、7μLのqRT-PCR grade water（Qiagen, Hilde, Germany）から構成されていた。PCR結果はGraphpad Prismソフトウェア(Ver.8.0.263)を用いて解析した。

  3. 結果
    3.1. 患者プロフィールとベースライン特性
    IDA群は、治療前にIDA（血清フェリチン20未満、ヘモグロビン12.0未満、MCB、平均体積80未満）と診断され、他の全身疾患がない15人の患者から構成された。治療後に検体を採取した10名の患者のうち、8名は経口鉄剤による治療を受け、2名は経口鉄剤の副作用のために静脈内鉄剤による治療を受けた。正常群は、16人の健康な閉経前女性から構成された。両群の年齢分布、身長、体重に有意差はなかった（表1）。
    表1. 研究対象者のベースライン特性
    表
    3.2. 平均的な分類学的組成
    健常者、IDA患者、および鉄分補給後にIDAから回復した人々の平均的な分類学的組成の差異を解析した（図1）。この結果の生データを表S1に示し、相対的な分類群存在量が1%以上の分類群間で有意差があるもののみを抽出し、表2にまとめた。
    栄養成分 15 00691 g001 550図1. 正常群（Normal）、IDA患者群（Pre）、鉄分補給後のIDAからの回復群（Post）の平均的な分類群構成。分類学上の相対的存在量は、（A）門、（B）綱、（C）目、（D）科、（E）属のレベルで分類し、1%未満の相対的存在量はETCで表した。グループの有意性の解析にはWilcoxon rank-sum testを用いた（* p < 0.05）。上付き文字のa,b,cは、有意差判定を行った群を示す（a, Normal-Pre; b, Pre-Post; c, Normal-Post）.
    表2. 群間で有意差を示した分類群の平均的な構成比。
    表
    群間差は、5つのクラス（Clostridia、Coriobacteriia、Negativicutes、Erysipelotrichi、Betaproteobacteria）、3つの目（Clostridiales、Coriobacteriales、Erysipelotrichales）、3科（Ruminococcaceae、Coriobacteriaceae、Erysipelotrichaceae）、3属（Faecalibacterium、Collinsella、Veillonella）で確認された。Clostridia綱、Clostridiales目、Ruminococcaceae科、Faecalibacterium属は同系統であり、IDA患者では健常者に比べて有意に減少していることが最も顕著な結果であった。さらに、鉄分を補給して回復した検体では、有意ではないものの、健常者に比べて再び増加した。健常者と回収者では、有意な差は認められなかった。その他の系統、コリオバクテリア綱、コリオバクテリア目、コリオバクテリア科、コリンセル属は、IDA患者において健常者に比べて組成比が低かったが、有意差はなかった。健常者に比べて回復した群では、有意に低かった。Negativicutes属-Veillonella属の系統については、健常者と比較して、IDA患者ではNegativicutes属の比率が、回復群ではVeillonella属の比率がそれぞれ有意に高くなった。Erysipelotrichi class-Erysipelotrichales order-Erysipelotrichaceae family系統は、IDA患者において鉄補給前に比べ鉄補給後に回復し、構成比が低いことが確認された。また、β-proteobacteriaクラスも前述と同様の結果を示した。さらに、上記のものは、すべてのランクと分類群にわたって唯一の有意差であった。
    3.3. α多様性解析
    健常者、IDA患者、鉄分補給でIDAから回復した被験者のα多様性を分析した（図2）。種の豊富さはAce、Chao1、Jacknife、OTUで、種の多様性はNPShannon、Shannon、Simpson、Phylogenetic diversityで検討した。どの多様性の結果も、3つのグループ間で統計的に有意な差は見られなかった。
    栄養成分 15 00691 g002 550図2. 健常者（Normal）、IDA患者（Pre）、鉄分補給でIDAから回復した被験者（Post）間のα多様性指数分析結果。種の豊富さは（A）Ace、（B）Chao1、（C）Jacknife、（D）OTUで、種の多様性は（E）NPShannon、（F）Shannon、（G）Simpson、（H）Phylogenetic diversityで分析した。解析結果はボックスプロットで示され、ボックスの上下は第1、第3四分位を表し、横帯は中央値を表している。3つのグループは、上記の分析結果のいずれにおいても、互いに統計的に有意な差はなかった。
    3.4. ベータダイバーシティ分析
    健常者、IDA患者、鉄分補給でIDAから回復した被験者の間でベータ多様性を分析した。
    グループ間のベータセットの有意性は、PERMANOVAで決定された（表3）。Jenson-Shannon (p = 0.037), Bray-Curtis (p = 0.017), Generalized UniFrac (p = 0.045) に基づく解析では、健常者とIDA患者の間で有意差が見られたが、UniFracに基づく解析では有意差はなかった。しかし、IDA患者における鉄分補給の前後では、どの解析でも有意差は見られなかった。さらに、鉄分補給後にIDAから回復した被験者では、健常者と比較して、どの解析においても有意差は認められなかった。
    表3. 健常者（Normal）、IDA患者（Pre）、鉄分補給後にIDAから回復した被験者（Post）間のベータ多様性指数。
    表
    4つの多様性指標を用いて、サンプルグループ間でPCoA（主座標分析）分析を行った。Jensen-Shannon、Bray-Curtis、General-ized UniFrac、UniFracの4つの多様性指標を用いて、サンプル群間のPCoA解析を行った（図3）。その結果、健常者と鉄分補給によりIDAから回復した被験者の分布パターンは類似していることが確認された。しかし、明確な区別はできないが、IDA患者の分布パターンは健常者、回復者の分布パターンとは異なることが確認された。
    栄養素 15 00691 g003 550Figure 3. 健常者（Normal）、IDA患者（Pre）、鉄分補給によりIDAから回復した被験者（Post）のPCoA（主座標分析）分析結果。(A) Jensen-Shannon, (B) Bray-Curtis, (C) Generalized UniFrac, (D) UniFrac法を適用して分析した。薄緑、青、黄の円はそれぞれNormal群、Pre群、Post群を表す。
    UPGMA（unweighted pair group method with the arithmetic mean）法により、群間のクラスタリング解析を行った（図4）。その結果、正常群はIDA患者の分布とは逆に、右に偏った分布をしていることがわかった。一方、鉄分補給によりIDAから回復した被験者は、一方に偏ることなく、均等に分布していた。
    Nutrients 15 00691 g004 550Figure 4. UPGMA 法による群間クラスタリングの結果。健常者（Normal）、IDA患者（Pre）、鉄分補給後にIDAから回復した被験者（Post）を対象に分析を行った。
    3.5. 分類学的バイオマーカーの探索
    グループ間の分類学的バイオマーカーをLEfSe解析とクラスカル・ワリスH検定で探索した（図5）。LDA（線形判別分析）スコアが3以上で、クラスカル・ワリスH検定で有意差を示した分類群のみをバイオマーカー候補と判断し、表示した。健常者と比較して、Clostridia class-Clostridiales order-Ruminococcaceae family-Faecalibacterium genus lineageの減少がIDA患者の重要なバイオマーカーであることがわかった（図5A）。さらに、IDA患者では、鉄補給後のErysipelotrichi class-Erysipelotrichales order-Erysipelotrichaceae family系統の減少がIDAからの回復と関連すると考えられている（図5B）。ここで、健常者と比較した回復者のVeillonella属の増加とCoriobacteriia class-Coriobacteriales order-Coriobacteriaceae family-Collinsell 属系統の減少を両群間のバイオマーカーとして解析した（図5C）。
    栄養成分 15 00691 g005 550図5. 健常者（Normal）、IDA患者（Pre）、鉄分補給後にIDAから回復した被験者（Post）間の分類学的バイオマーカー解析結果。LEfSe（LDA Effect Size）分析法を適用した。分類学上のクラドグラムは、Kruskal-Wallis検定の結果が有意で（p < 0.05）、LDA（線形判別分析）スコアが3以上の分類群のみ表示されています。比較は、（A）ノーマル群とプレ群、（B）プレ群とポスト群、（C）ノーマル群とポスト群で行い、赤は前記の群に比べより多く、緑はその反対を表す。
    3.6. 機能性バイオマーカーの予測
    健常者、IDA患者、鉄分補給後にIDAから回復した被験者のグループ間で、機能的バイオマーカーの予測に関する分析を行った（表4）。LEfSe解析に基づき、6つのオーソロジー（IV型分泌システムタンパク質 VirD4, K03205; DNA複製タンパク質 DnaC, K02315; DNA topoisomerase III, K03169; 染色体分割タンパク質 K03496; putative DNA primase/helicase, K06919; and DNA primase, K02316）、4つのモジュール（Uridine monophosphate biosthesis, glutamine (+PRPP) => UMP, M00051; ヘム生合成、グルタミン酸⇒ヘム、M00121；グリコーゲン生合成、グルコース1P⇒グリコーゲン／デンプン、M00854；β酸化、アシルCoA合成、M00086）、およびLDA効果サイズが2以上の2経路（ライソゾーム、ko04142；インスリンシグナル経路、ko04910）が機能バイオマーカーとして特定されました。ヘム生合成、グルタミン⇒ヘム」モジュール、「リソゾーム経路」、「インスリンシグナリング経路」は、IDA患者において健常者よりも高い値を示した。鉄補給で回復した被験者では、値は再び低くなり健常者と同程度の値となった。今述べたものを除き、機能性バイオマーカーは逆の傾向を示した。すなわち、IDA患者では健常者よりも組成比が低かった。しかし、鉄分補給後にIDAから回復した被験者の場合、その値は再び健常者と同程度に増加する傾向が見られた。
    表4. 健常者群（Normal）、IDA患者群（Pre）、鉄分補給によりIDAから回復した被験者群（Post）の機能性バイオマーカー予測結果。
    表
    3.7. qRT-PCRに基づくフェカリバクテリウムの定量分析
    健常者、IDA患者、鉄分補給によりIDAから回復した被験者の糞便中のFaecalibacterium属とF. prausnitziiについてqRT-PCRに基づく定量分析を行った（図6）。データ解析の結果、Faecalibacteriumの負荷量は、IDA患者では正常なサンプルよりも低く、鉄補給処理後に再び有意に増加した（、p < 0.05）ことがわかった（図6A）。また、腸内細菌叢における鉄補給後のFaecalibacteriumの回収量も、正常群サンプルと有意に異なっていた（, p < 0.01）。F. prausnitziiについては、通常群と回収群の間に有意差はなかった。同時に、IDA患者と比較した場合、回収群で有意に高かった（、p < 0.01）（図6B）。これらのPCRの結果は、NGSシーケンサーの結果を確認し、サンプル中のFaecalibacteriumとF. prausnitziiのアバンダンスを示しています。
    栄養成分 15 00691 g006 550Figure 6. 健常者（Normal）、IDA患者（Pre）、鉄分補給によりIDAから回復した被験者（Post）のフェカリバクテリウムとF. prausnitziiの定量結果。サンプル中の（A）Faecalibacteriumと（B）F. prausnitziiの菌量は、qRT-PCRで定量した。統計解析は一元配置分散分析で行い、群間の有意差を求めた（ p < 0.05, ** p < 0.01）。

  4. 考察
    2019年現在、食事中の鉄分不足による貧血の世界的な発生率は、95歳以上の高齢者を除くすべての年齢層で他の疾患よりも高く、特に10万人当たりの有病率では、男性、9歳以下の女性ともに高かった。 また、食事中の鉄分不足による貧血の発生率は高齢男性と若年女性で高い[49]。有病率では、小児と成人、特に妊娠可能な年齢の女性で高かった[49]。このように、IDAの発生が最も多い生後6～34ヶ月の乳児におけるIDAに関連する腸内細菌の異常に関する研究が既に報告されている[50]。さらに、この関連で、鉄強化が子どもの腸内細菌叢に与える影響についての調査結果も報告されている[51]。さらに、最近、2022年12月に、妊婦に限定されるが、若い女性のIDAとマイクロバイオームに関する研究が発表された[6]。しかし、文献を調査したが、IDAの有病例の多くを占める妊娠可能な年齢の女性を対象としたIDAとマイクロバイオームに関する報告はまだない。そこで、本研究では、出産適齢期の女性における健常者とIDA患者の腸内細菌群の特徴を調べることを主目的としました。さらに、鉄分補給でIDAから回復した被験者にも調査を拡大した。
    本研究では、健常者とIDA患者の間で細菌群集の分布様相のβ多様性に有意な変動があることが示された。IDA患者における腸内細菌の異常は、先に紹介した乳幼児や妊婦を対象とした研究結果においても同様であった。乳幼児や妊婦を対象とした2つの研究では、対照群とIDA群がそれぞれ10名の患者からなり、群間のβ多様性指数は有意であった[6,50]。しかし、α多様性の指標でもある種の多様性と豊かさには、群間で有意な差は見られなかった。分類群ごとの具体的な変化パターンとしては、Clostridia class, Clostridiales order, Ruminococcaceae family, Faecalibacterium genus（いずれも同系統）が健常者と比較してIDA患者で有意な減少を示した。Clostridiaは45.6%から33.8%、Ruminococcaceaeは31.2%から19.6%、Faecalibacteriumは15.3%から7.5%に減少しており、7.8〜11.8%の範囲で有意に減少していることが示された。その他の分類群のうち、構成比が1%を超えて有意な差が見られたものについては、0.4%から8.8%の範囲と低い値であった。しかし、増減の幅は0.2%から4.3%にとどまっている。ランク中で最も特異性の高い属に着目すると、CollinsellaとVeillonellaの間に有意な差が見られた。IDA患者では健常者と比較して，前者は2.6％から1.2％に減少し，後者は0.4％から2.0％に増加した．属レベルでは、Faecalibacteriumが14.9%、Veillonellaが3.9%と再び増加し、Collinsellaは0%とさらに減少している。もちろん、大きな変化を示した分類群はすべて必須である。しかし、Faecalibacterium系統の場合、構成比が非常に高く、変化の幅も非常に広いので、IDAにおいて重要な役割を担っていることは間違いなさそうです。LEfSeの結果は、この重要性を裏付けています。
    今日、モミミキュート門、クロストリジウム綱、ルミノコックス科の重要なメンバーが、健康な成人の腸内ミクロバイオームで最も一般的な細菌となり、全細菌数の5％以上、場合によっては約15％まで構成している[52]。大腸では最も重要な酪酸産生菌である。これは、ヒトの健康のバイオマーカーと考えられており、個体数が減少すると炎症プロセスを促進し、炎症性腸疾患や大腸癌と相関している[53]。したがって、この種は潰瘍性大腸炎とクローン病の鑑別に役立つ貴重な潜在的バイオマーカーであり、様々な腸疾患の有望な治療戦略としてプロバイオティクスの潜在的活性成分であると考えられている[54]。本研究の NGS 検査結果によると、この種は健常者では 3.17% を占めていたが、IDA 患者では 2.65% に減少し、鉄分補給により IDA から回復した被験者では 6.12% に増加した。NGSデータでは群間の有意差は認められなかったが、PCR検証実験により、IDA患者の鉄分補給前後で有意差が確認された。以前の臨床研究において、正常な被験者と比較して妊娠性貧血の被験者では、フェカリス菌の減少が重要なバイオマーカーとして同定され、これは本研究の結果と同様である[55]。しかし、鉄代謝とIDAにおけるFaecalibacteriumに関するより多くの研究が必要である。ある報告では、無菌マウスにF. prausnitziiを投与すると、大腸の細胞内鉄ホメオスタシスを調節するタンパク質であるフェリチンの増加が誘導された。この結果は、この現象に関与するメカニズムに関連する可能性がある[56]。さらに、F. prausnitziiは代表的な酪酸産生性抗炎症菌であり、このメカニズムを理解する上で、この酪酸の抗炎症作用に注目する必要があると思われる[57]。鉄とそのホメオスタシスは炎症反応と密接に関係しており、炎症や貧血などの慢性疾患との最も明らかな関連性の背景には、炎症状態を改善する鉄欠乏に対する適応がある[58]。特に、鉄分補給後のIDAからの改善とフェカリバクテリウムの回復は、炎症によって促進された低フェリム状態に関して理解することができる[58]。しかし、Faecalibacteriumを減少させるdysbiosisの前にIDAが誘発されたのか、因果関係が逆転しているのか不明である。また、鉄の補給がFaecalibacteriumの回復とIDAの改善につながったのか、因果関係が逆転しているのかも不明である。しかし、鉄欠乏とそれに伴うIDA、それに伴う腸内細菌叢の状態、それに伴う炎症は、すべて密接に関連し、複雑な関係を持っています。
    さらに、ヘム生合成モジュールは、IDA患者では健常者に比べて増加し、IDAから回復した被験者では鉄分補給後に再び減少しました。この結果は、機能的バイオマーカーの予測に過ぎないかもしれないが、ヘムはバクテリアの呼吸などの重要な生化学的プロセスに不可欠であることから、別の重要なメカニズムと解釈することができる[59,60]。しかし、ヘム生合成とフェーカリバクテリウムの役割に関するより深い研究が必要である。
    本研究の最も顕著な結果は、健常者と比較してIDA患者ではdysbiosisが見られ、鉄分補給後のIDAの改善とともに回復する傾向があったことである。この結果は、分類群の構成のパターン変化に見ることができる。しかし、群間における細菌群集の構成には統計学的有意性に関してまだ限界があり、より多くの被験者を用いたさらなる解析が必要であると思われる。特に注目されたFaecalibacteriumについては、IDA患者において有意に減少し、鉄分補給により回復したことから、本分類群がIDAの診断・治療に応用される可能性を示しています。しかし、これらのマイクロバイオームの状態の変化や分類学的バイオマーカーは、動物疾患モデルで検証するまでは一度しか確認することができません。また、CollinsellaとVeillonellaの変化には注意が必要であり、これらについても追加実験を行う必要がある。本研究では機能性バイオマーカーが予測されたが、IDAにおける微生物に関連したクロストークを真に理解するためには、糞便中の細菌の全ゲノム解析が必要である。本研究にはいくつかの限界があるが、これらの結果は、妊娠可能な年齢の女性のためのマイクロバイオームベースのIDA診断、予防、治療戦略を開発するための一次データとして利用することが可能である。

  5. 5.結論
    IDAに脆弱な若年女性の糞便を対象に、16S遺伝子ベースのメタゲノム解析によるマイクロバイオーム特性解析研究を実施した。その結果、IDA患者では健常者と比較して細菌群集の特徴に有意差があること、IDAの改善とともに病態時の腸内異常叢が回復することが示された。また、IDA患者ではFaecalibacteriumが有意に減少し、鉄分補給により有意に正常値まで回復することが確認された。いくつかの制約があるものの、本研究は、特に妊娠可能な年齢の女性におけるIDAに対して、宿主-微生物間のクロストークに基づく治療および予防戦略を開発するための基礎となることが期待される。
    補足資料
    以下は、https://www.mdpi.com/article/10.3390/nu15030691/s1、表S1：異なる分類レベルでの細菌群集の分布をオンラインでご覧いただけます。
    著者による貢献
    構想、S.Y.Y., J.-H.W. and H.-Y.S.; 方法論 S.Y.Y., H.S., S.J., S.K., H.-A.P., F.G., M.J.K., M.-Y.L., K.H.K. and N.L.; 形式解析 S.Y.Y.., を、S.Y.Y., M.J.K., M.-Y.L., K.H.K., N.L. and J.-H.W.; 執筆-原案作成、H.S., S.Y.Y., A.u.-H. 執筆、レビュー、編集、H.S., S.Y.Y., A.u.-H., M.A.R., J.-H.W. and H.-Y.S.; Visualization, H.S. and S.K.; Supervision, S.Y.Y., J.-H.W. and H.-Y.S... S.Y.Y., J.-H.W. and H.-Y.S.; Project administration, S.Y.Y., J.-H.W. and H.-Y.S.; Funding acquisition, S.Y.Y., J.-H.W. and H.-Y.S. All authors have read and agree for the published version of the manuscript.著者全員が本原稿に目を通し、同意している。
    資金提供
    本研究は，韓国国立研究財団（NRF）の韓国政府助成金（MSIT）（No.2021R1G1A1094322）の支援を受けて実施した．また，本研究は韓国貿易産業エネルギー省（MOTIE，韓国）の技術革新プログラム（20018499）の支援を受けた。さらに，本研究はSoonchunhyang大学研究基金の支援を受けている。
    施設審査委員会声明
    この研究は、ヘルシンキ宣言の倫理原則に従って行われ、Soonchunhyang大学病院のInstitutional Review Board（IRB番号2020-08-017）が承認した。
    インフォームドコンセントの表明
    すべての研究対象者からインフォームド・コンセントの文書による同意を得た。この文書には、特定の被験者を識別できるような情報は含まれていない。
    データの利用可能性に関する声明
    論文に含まれるデータおよび本研究の結果を裏付ける原データは、合理的な要請があれば、対応する著者から入手可能である。
    謝辞
    著者らは、研究参加者に感謝する。また、データ収集に協力し、実験期間中に手伝ってくれた各施設の研究員にも感謝する。また、医学的なアドバイスと英文校正をしていただいたUhjin Song氏に感謝する。
    利益相反について
    著者らは、申告すべき利益相反はない。
    参考文献
    Clark, S.F. 鉄欠乏性貧血. Nutr. Clin. Pract. 2008, 23, 128-141. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed].
    Zurawski, D.V.; McLendon, M.K. Monoclonal Antibodies as an Antibacterial Approach Against Bacterial Pathogens（細菌性病原体に対する抗菌アプローチとしてのモノクローナル抗体）. 抗生物質2020, 9, 155. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed].
    Levi, M.; Simonetti, M.; Marconi, E.; Brignoli, O.; Cancian, M.; Masotti, A.; Pegoraro, V.; Heiman, F.; Cricelli, C.; Lapi, F. 鉄欠乏性貧血の決定因子における性差....について: 欧州4カ国で実施された集団ベースの研究。Ann. Hematol. 2019, 98, 1573-1582. [Google Scholar] [CrossRef][PubMed]を参照してください。
    Vos, T.; Abajobir, A.A.; Abate, K.H.; Abbafati, C.; Abbas, K.M.; Abd-Allah, F.; Abdulkader, R.S.; Abdulle, A.M.; Abebo, T.A.; Abera, S.F.; et al. 195カ国における328疾患と傷害に関する世界、地域、国の発生、普及、障害で生きた年、1990～2016年: Global Burden of Disease Study 2016のための系統的分析。Lancet 2017, 390, 1211-1259. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed].
    Kumar, S.B.; Arnipalli, S.R.; Mehta, P.; Carrau, S.; Ziouzenkova, O. Iron Deficiency Anemia.鉄欠乏性貧血: 鉄欠乏性貧血：栄養的および包括的な緩和戦略の有効性と限界。栄養2022、14、2976。[Google Scholar] [CrossRef]を参照してください。
    Chen, H.; Wu, W.; Tang, S.; Fu, R.; Gong, X.; Hou, H.; Xu, J. Altered fecal microbial and metabolic profile reveals potential mechanisms underlying iron deficiency anemia in pregnant women in China.（中国の妊婦における鉄欠乏性貧血の基礎となる糞便微生物および代謝プロファイルの変化から、その潜在的なメカニズムを明らかにした。Bosn. J. Basic Med. Sci. 2022, 22, 923-933. [Google Scholar] [CrossRef]を参照してください。
    DeLoughery, T.G. Iron Deficiency Anemia. Med. Clin. N. Am. 2017, 101, 319-332. [Google Scholar] [CrossRef]を参照してください。
    McArdle, H.J.; Gambling, L.; Kennedy, C. 妊娠中の鉄欠乏症。胎盤機能と胎児転帰への影響。Proc. Nutr.Soc.2014、73、9-15。[Google Scholar] [CrossRef]を参照してください。
    Cassat, J.E.; Skaar, E.P. Iron in infection and immunity. セルホストマイクロビー 2013, 13, 509-519. [Google Scholar] [CrossRef]を参照してください。
    鉄制限赤血球の検出、評価、管理。血液 2010, 116, 4754-4761. [Google Scholar] [CrossRef]を参照してください。
    Stevens, G.A.; Paciorek, C.J.; Flores-Urutia, M.C.; Borghi, E.; Namaste, S.; Wirth, J.P.; Suchdev, P.S.; Ezzati, M; Rohner, F.; Flaxman, S.R.; et al. 2000-19 年の女性と子供の貧血重症度の全国、地域、世界推定：人口代表データのプーリング解析.A.S....Stevens, G.A., K., M., D.B.A.....etc.（英語 Lancet Glob. Health 2022, 10, e627-e639. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed].
    Pavord, S.; Myers, B.; Robinson, S.; Allard, S.; Strong, J.; Oppenheimer, C.; British Committee for Standards in Haematology(英国血液学標準委員会). 妊娠中の鉄欠乏症の管理に関する英国のガイドライン。Br. J. Haematol. 2012, 156, 588-600. [Google Scholar] [CrossRef][PubMed]を参照してください。
    Cook, R.L.; O'Dwyer, N.J.; Parker, H.M.; Donges, C.E.; Cheng, H.L.; Steinbeck, K.S.; Cox, E.P.; Franklin, J.L.; Garg, M.L.; Rooney, K.B.; et al. Iron Deficiency Anemia, Not Iron Deficiency, Is Associated with Reduced Attention in Healthy Young Women.鉄欠乏貧血は、若い女性において注意力の低下と関連しています。ニュートリエンツ 2017, 9, 1216. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed].
    Chueh, H.W.; Jung, H.L.; Shim, Y.J.; Choi, H.S.; Han, J.Y.; on behalf of the Red Blood Cell Disorder Working Party of The Korean Society of Hematology.韓国血液学会赤血球障害ワーキングパーティを代表して.韓国高齢者における高貧血の有病率. 韓国の高齢者における高い貧血の有病率、出現する医療問題：2007-2016 KNHANES. BMC Geriatr. 2020, 20, 509. [Google Scholar] [CrossRef]を参照してください。
    Adamu, A.L.; Crampin, A.; Kayuni, N.; Amberbir, A.; Koole, O.; Phiri, A.; Nyirenda, M.; Fine, P. Malawian men and women in anemia severity and typeの有病率とリスクファクター: 都市と農村の違い。Popul. Health Metr. 2017, 15, 12. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed].
    WHO 世界保健機関. 女性と子どもの貧血; WHO: ジュネーブ、スイス、2021年。Google Scholar] [PubM] WHO World Health Organization.
    Rahman, M.M.; Abe, S.K.; Rahman, M.S.; Kanda, M.; Narita, S.; Bilano, V.; Ota, E.; Gilmour, S.; Shibuya, K. Maternal anemia and risk of adverse birth and health outcomes in Low and Middle-income countries（中低所得国において、母親の貧血と出産や健康上の有害な結果のリスク）: システマティックレビューとメタアナリシス1,2. Am. J. Clin. Nutr. 2016, 103, 495-504. [Google Scholar] [CrossRef]を参照してください。
    Milman, N.; Taylor, C.L.; Merkel, J.; Brannon, P.M. ヨーロッパにおける妊婦および生殖年齢女性における鉄の状態。Am. J. Clin. Nutr.2017、106、1655S-1662S. [Google Scholar] [CrossRef]を参照してください。
    Levi, M.; Rosselli, M.; Simonetti, M.; Brignoli, O.; Cancian, M.; Masotti, A.; Pegoraro, V.; Cataldo, N.; Heiman, F.; Chelo, M.; et al. ヨーロッパ4か国における鉄欠乏性貧血の疫学。プライマリーケアにおける集団ベースの研究。Eur. J. Haematol. 2016, 97, 583-593. [Google Scholar] [CrossRef]を参照してください。
    Kumar, A.; Sharma, E.; Marley, A.; Samaan, M.A.; Brookes, M.J. Iron deficiency anaemia: 鉄欠乏性貧血：病態生理、評価、実践的管理. BMJオープンGastroenterol。2022, 9, e000759. [Google Scholar] [CrossRef]を参照してください。
    Zakrzewski, M.; Wilkins, S.J.; Helman, S.L.; Brilli, E.; Tarantino, G.; Anderson, G.J.; Frazer, D.M. Sucrosomial (R) iron の補給は、マウスの硫酸第一鉄と比較して腸内マイクロバイオームの好ましい変化をもたらす。Biometals 2022, 35, 27-38. [Google Scholar] [CrossRef]を参照してください。
    Soriano-Lerma、A; Garcia-Burgos, M; Alferez, M.J.M.; Perez-Carrasco, V; Sanchez-Martin, V; Linde-Rodriguez, A; Ortiz-Gonzalez, M; Soriano, M; Garcia-Salcedo, J.A.; Lopez-Aliaga, I. Gut microbiome-short-chain fatty acids interplay in the context of iron deficiency anaemia.（短期間のうちに、鉄分貧血の文脈で、消化器系の微生物-脂肪酸の相互作用が見られる）. Eur. J. Nutr. 2022, 61, 399-412. [Google Scholar] [CrossRef][PubMed]を参照してください。
    Liu, H.; Wu, W.; Luo, Y. Oral and intravenous iron treatment alter the gut microbiome differentially in dialysis patients.（鉄の経口投与と静脈内投与は透析患者の腸内細菌叢を異なる形で変化させる）. Int. Urol. Nephrol. 2022, 61, 399-412. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed].
    Johnson-Wimbley, T.D.; Graham, D.Y. Diagnosis and management of iron deficiency anemia in the 21st century（21世紀における鉄欠乏性貧血の診断と管理）. Ther. Adv. Gastroenterol. 2011, 4, 177-184. [Google Scholar] [CrossRef]を参照してください。
    Human Microbiome Project-Core Microbiome Sampling Protocol A; HMP Initiative; National Institutes of Health (NIH): Bethesda, MD, USA, 2010.
    Rickham, P.P. Human experimentation. 世界医師会の倫理綱領。ヘルシンキ宣言。Br. Med. J. 1964, 2, 177. [Google Scholar] [PubMed]．
    Kim, S.; Seo, H.; Rahim, M.A.; Tajdozian, H.; Kim, Y.-S.; Song, H.-Y. 韓国における骨盤炎症性疾患女性における膣内微生物の特徴。Pol. J. Microbiol. 2021, 70, 345-357. [Google Scholar] [CrossRef].
    Myers, E.W.; Miller, W. Optimal alignments in linear space（線形空間における最適アライメント）. バイオインフォマティクス 1988, 4, 11-17. [Google Scholar] [CrossRef]を参照してください。
    Wheeler, T.J.; Eddy, S.R. nhmmer: プロファイルHMMを用いたDNA相同性検索. バイオインフォマティクス 2013, 29, 2487-2489. [Google Scholar] [CrossRef].
    Rognes, T.; Flouri, T.; Nichols, B.; Quince, C.; Mahé, F. VSEARCH: メタゲノム解析のための汎用的なオープンソースツール。PeerJ 2016, 4, e2584. [Google Scholar] [CrossRef]を参照してください。
    Yoon, S.H.; Ha, S.M.; Kwon, S.; Lim, J.; Kim, Y.; Seo, H.; Chun, J. Introducing EzBioCloud.EzBioCloudは、分類学的に統一されたデータベース。このデータベースは、16S rRNA遺伝子配列と全ゲノムアセンブリを分類学的に統合したデータベースです。を紹介。J. Syst. Evol. Microbiol. 2017, 67, 1613-1617. [Google Scholar] [CrossRef]を参照してください。
    Shokralla, S.; Porter, T.M.; Gibson, J.F.; Dobosz, R.; Janzen, D.H.; Hallwachs, W.; Golding, G.B.; Hajibabaei, M.J.S.R. Massively parallel multiplex DNA sequencing for specimen identification using an Illumina MiSeq platform.（Intel製マルチセックプラットフォームによる検体識別のための超並列マルチプレックスDNAシーケンス）。Sci. Rep. 2015, 5, 9687. [Google Scholar] [CrossRef] [Green Version].
    Chao, A.; Lee, S.M. Estimating the number of classes via sample coverage. J. Am. Stat. 1992, 87, 210-217. [Google Scholar] [CrossRef]を参照。
    を用いた集団サイズの推定．バイオメトリクス 1987, 43, 783-791. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed].
    を用いた，捕獲確率が動物によって異なる場合の集団サイズのロバスト推定．を用いた。[Google Scholar] [CrossRef].
    また、このような場合、「震災の影響」を考慮する必要がある。Environ. を用いた。このような場合、「曖昧さ」を解消することが重要である。[Google Scholar] [CrossRef].
    生物多様性の測定. Curr. Biol. 2021, 31, R1174-R1177. [Google Scholar】【CrossRef】【PubMed】。
    Faith, D.P. 保全評価と系統的多様性. 生物. Conserv. 1992, 61, 1-10. [Google Scholar] [CrossRef]を参照。
    林淳一：シャノンエントロピーに基づくダイバージェンス尺度．IEEE Trans. Inform. Theory 1991, 37, 145-151. [Google Scholar] [CrossRef]。
    Beals, E.W. Bray-Curtis ordination: 多変量生態データの解析のための効果的な戦略。また、このような研究成果をもとに、「生態学的研究の進歩」(Elsevier: Amsterdam, The Netherlands, 1984; Volume 14, pp.1-55) を発表しました。[Google Scholar]
    このような場合、「環境共変量とマイクロバイオーム組成の関連付け」を一般化されたUniFrac距離を使って行う。このような場合、「曖昧さ」を解消することが重要です。[Google Scholar] [CrossRef].
    このような場合、「痒いところに手が届く」「痒いところに手が届く」「痒いところに手が届く」「痒いところに手が届く」「痒いところに手が届く」「痒いところに手が届く」。パイロシーケンスやPhyloChipデータの解析を含む、微生物コミュニティのハイスループット系統解析の促進。ISME J. 2010, 4, 17-27. [Google Scholar] [CrossRef]を参照してください。
    また、このような研究成果をもとに、研究者・研究者間の情報共有の場を提供し、研究者・研究者間の相互理解を深めることを目的としています。ゲノムバイオロジー 2011, 12, R60. [Google Scholar] [CrossRef] [グリーンバージョン]。
    Kruskal, W.H.; Wallis, W.A. Use of Ranks in one-criterion variance analysis（1基準分散分析におけるランクの使用）. J. Am. Stat. 1952, 47, 583-621. [Google Scholar] [CrossRef]。
    このような場合、「生物学的パスウェイの再構築と推論」のためのパーシモンアプローチが必要です。このような場合、「痒いところに手が届く」という言葉があります。2009, 5, e1000465. [Google Scholar] [CrossRef]。
    Douglas, G.M.; Maffei, V.J.; Zaneveld, J.R.; Yurgel, S.N.; Brown, J.R.; Taylor, C.M.; Huttenhower, C.; Langille, M.G.J. PICRUSt2 for prediction of metagenome function.メタゲノムの機能予測。Nat. Biotechnol. 2020, 38, 685-688. [Google Scholar] [CrossRef]を参照。
    Fitzgerald, C.B.; Shkoporov, A.N.; Sutton, T.D.S.; Chaplin, A.V.; Velayudhan, V.; Ross, R.P.; Hill, C. Faecalibacterium prausnitzii genomesの比較解析により高いレベルのゲノム可塑性を示し、新しい種レベルの分類に分離できることを保証する. BMC Genom. 2018, 19, 931. [Google Scholar] [CrossRef][PubMed]を参照してください。
    Zheng, G.; Yampara-Iquise, H.; Jones, J.E.; Andrew Carson, C. Development of Faecalibacterium 16S rRNA gene marker for identification of human faeces.（ヒト糞便の識別のためのフェカリス菌16S rRNA遺伝子マーカーの開発）。J. Appl. Microbiol. 2009, 106, 634-641. [Google Scholar] [CrossRef].
    Safiri, S.; Kolahi, A.A.; Noori, M.; Nejadghaderi, S.A.; Karamzad, N.; Bragazzi, N.L.; Sullman, M.J.M.; Abdollahi, M.; Collins, G.S.; Kaufman, J.S.; et al. 204カ国・地域における貧血とその基礎的原因の負担、1990-2019: Global Burden of Disease Study 2019の結果。J. Hematol. Oncol. 2021, 14, 185. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed].
    Muleviciene, A.; D'Amico, F.; Turroni, S.; Candela, M.; Jankauskiene, A. Iron deficiency anemia-related gut microbiota dysbiosis in infants and young children（乳幼児における鉄欠乏性貧血に関連する腸内細菌叢の異常。パイロットスタディ。Acta Microbiol. Immunol. Hung. 2018, 65, 551-564. [Google Scholar] [CrossRef][PubMed]を参照してください。
    Zimmermann, M.B.; Chassard, C.; Rohner, F.; Goran, E.K.N.; Nindjin, C.; Dostal, A.; Utzinger, J.; Ghattas, H.; Lacroix, C.; Hurrell, R.F. The effects of iron fortification on the gut microbiota in African children a randomized controlled trial in Cote d'Ivoire.の項参照。Am. J. Clin. Nutr.2010、92、1406-1415。[Google Scholar] [CrossRef][PubMed]を参照してください。
    Miquel, S.; Martin, R.; Rossi, O.; Bermudez-Humaran, L.G.; Chatel, J.M.; Sokol, H.; Thomas, M.; Wells, J.M.; Langella, P. Faecalibacterium prausnitzii and human intestinal health.日本人の腸内環境と腸内細菌の関係. Curr. Opin. Microbiol. 2013, 16, 255-261. [Google Scholar] [CrossRef]を参照してください。
    Ferreira-Halder, C.V.; Faria, A.V.S.; Andrade, S.S. Action and function of Faecalibacterium prausnitzii in health and disease（健康と病気におけるフェカリス菌の働き）. Best Pr. Res. Clin. Gastroenterol. 2017, 31, 643-648. [Google Scholar] [CrossRef]を参照してください。
    Lopez-Siles, M.; Duncan, S.H.; Garcia-Gil, L.J.; Martinez-Medina, M. Faecalibacterium prausnitzii.（フェカリバクテリウム・プラウスニッツィー）。微生物学から診断学、予後学へ。ISME J. 2017, 11, 841-852. [Google Scholar] [CrossRef][PubMed]を参照してください。
    Long, Y.; Liang, F.; Guo, R.; Zhu, C.; Zhao, X.; Wang, X.; Liu, F.; Jiang, M.; Liang, Q.; Zeng, S.; et al. Gestational AnemiaにおけるGut Microbiota Signatures in Gestational Anemia（妊娠貧血における消化管マイクロバイオータの特徴）. Front. Cell Infect. Microbiol. 2021, 11, 549678. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed].
    Deschemin, J.C.; Noordine, M.L.; Remot, A.; Willemetz, A.; Afif, C.; Canonne-Hergaux, F.; Langella, P.; Karim, Z.; Vaulont, S.; Thomas, M.; et al. 微生物が腸細胞の鉄センシングをシフトさせる. FASEB J. 2016, 30, 252-261. [Google Scholar] [CrossRef][PubMed]を参照してください。
    Chen, W.; Zhang, S.; Wu, J.; Ye, T.; Wang, S.; Wang, P.; Xing, D. Butyrate-producing bacteria and the gut-heart axis in atherosclerosis. Clin. Chim. Acta 2020, 507, 236-241. [Google Scholar] [CrossRef]を参照してください。
    Wessling-Resnick, M. Iron homeostasis and the inflammatory response. Annu. Rev. Nutr. 2010, 30, 105-122。[Google Scholar] [CrossRef]を参照してください。
    原核生物におけるヘム生合成(Layer, G. Heme Biosynthesis in Prokaryotes). Biochim. Biophys. Acta Mol. Cell Res. 2021, 1868, 118861. [Google Scholar] [CrossRef]を参照してください。
    Dailey, H.A.; Dailey, T.A.; Gerdes, S.; Jahn, D.; Jahn, M.; O'Brian, M.R.; Warren, M.J. Prokaryotic Heme Biosynthesis（原核生物ヘム生合成）: 原核生物のヘム生合成：共通の必須産物への複数の経路。Microbiol. Mol. Biol. Rev. 2017, 81, e00048-16. [Google Scholar] [CrossRef][グリーンバージョン]。
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