幼児期のウイルス性細気管支炎後のアレルギー性喘息リスク因子としての2型サイトカイン遺伝子

哉百名


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ORIGINAL RESEARCH（オリジナル研究）論文
Front. Immunol., 06 January 2023
第2部 粘膜免疫
第13巻 - 2022年｜https://doi.org/10.3389/fimmu.2022.1054119
この記事は、Research Topicの一部です。
気管支炎における免疫学、ウイルス学、遺伝学、エピジェネティクス間のギャップを埋める。気管支炎における免疫学、ウイルス学、遺伝学、エピジェネティクス間のギャップを埋める：喘息発症へのマルチオミクスパスウェイ

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幼児期のウイルス性細気管支炎後のアレルギー性喘息リスク因子としての2型サイトカイン遺伝子
Zihan Dong1,2† Åsne Myklebust3,4† Ingvild Bjellmo Johnsen4 Tuomas Jartti5,6,7 Henrik Døllner3,4 Kari Risnes3,4*‡ and Andrew T. DeWan2,8*‡.
1イェール大学公衆衛生学部生物統計学科、ニューヘブン、コネチカット州、アメリカ合衆国
2周産期・小児・環境疫学センター、エール大学公衆衛生学部、ニューヘイブン、コネチカット州、アメリカ合衆国
3ノルウェー、トロンハイム、大学病院、St Olav病院、小児科クリニック
4ノルウェー科学技術大学臨床分子医学部、ノルウェー、トロンハイム
5オウル大学PEDEGO研究ユニット、オウル、フィンランド
6オウル大学病院小児科・思春期医学科（フィンランド、オウル市
7フィンランド、トゥルク、トゥルク大学病院、小児科・思春期医学部
8米国コネチカット州ニューヘブン市、エール大学公衆衛生学部、慢性疾患疫学科
背景 喘息のゲノムワイド関連研究では、2型関連遺伝子のバリアントとの関連が明らかにされている。また、喘息発症における遺伝子変異とウイルス性気管支炎の特異的な相互作用が示唆されている。

目的 学童期のアレルギー性喘息の危険因子として2型サイトカイン関連遺伝子の遺伝子変異を遺伝子ベースで解析し、さらに幼児期の特定のウイルス感染症との相互作用を検討すること。

方法 気管支炎の既往のある小児と対照のコホートを前向きに調査し、学齢期にフォローアップのために来院させた。この調査には、詳細な肺機能検査、臨床検査、およびアンケート調査が含まれ、ウイルスへの曝露については盲検化されていた。アレルギー性喘息は、実験室で検証されたアトピー（好酸球数の上昇またはアレルゲンへの感作）に加え、典型的な症状に加えて客観的な可変性気道閉塞と定義された。9つの2型サイトカイン候補遺伝子について、ターゲットおよび完全なシークエンスが行われた。IL4、5、13、25、33、37、IL17RB、CRLF2、TSLPの9つの2型サイトカイン候補遺伝子について、ターゲットおよび完全なシークエンスが行われた。

結果 追跡調査時点で、遺伝的データを持つ小児は109人で、そのうち気管支炎の既往を持つものは91人（respiratory syncytial virus 46%、human rhinovirus 24%、human metapneumovirus 15%、mixed viral etiology 14%）と、持たないものは18人であった。年齢中央値は9.4歳（範囲6-13），41人（38％）が検査でアトピーと確認された．21人（19％）がアレルギー性喘息の定義に合致していた。年齢、性別、5つのウイルスカテゴリーで調整した結果、IL33はアレルギー性喘息発症との正の関連について名目上の有意性（p = 0.017）を達成した。遺伝子-ウイルス相互作用解析では、IL17RBのバリアントセットが、ヒトメタニューモウイルス感染と名目上有意な正の相互作用を示した（p＝0.05）。

結論 この結果は、アレルギー性喘息リスクの多因子性を強調するものであり、ウイルス感染と遺伝性遺伝子変異の両方がリスク上昇に寄与していることを示している。IL33とIL17RBの結果は名目上有意であり、治療薬の設計や早期スクリーニングのための候補ターゲットとなりうるが、これらの結果は独立した研究で再現する必要がある。

はじめに
喘息は小児に最も多い慢性疾患であり、気道過敏性、粘液分泌過多、通常2型サイトカインが支配する炎症反応の過多が特徴である(1)。ウイルス性細気管支炎に伴う喘息発症と2型サイトカインに関連する遺伝的リスクバリアントの役割の可能性は、これまでの研究では検討されていなかった。また、ウイルスによる気管支炎が喘鳴の再発や喘息と関連しているという証拠があり、特にライノウイルスは喘息の重要な危険因子として認識されている(2-4)。

IL33と胸腺間質性リンパポエチン（TSLP）は、ウイルスやアレルゲンなどの誘因に反応して気道上皮から放出されるアラミンとして機能するサイトカインで、喘息の2型反応を促進します。IL33とTSLPはともに、2型サイトカイン産生と好酸球レベルに対して相乗的な作用を示す（5, 6）。TSLPとIL33は、喘息治療のために個別化された重要な新規ターゲットであると考えられ、これらの経路に対する抗体医薬が開発されている（7, 8）。テゼペルマブは、抗TSLPヒトモノクローナル抗体で、2型サイトカインレベルを正常化し（9）、臨床試験では、コントロール不能な重症喘息患者において、増悪率をプラセボに対して有意に減少させました（10）。アステゴリマブは、IL33シグナルを遮断する抗ST2抗体で、喘息増悪の抑制に有望視されています（11）。喘息患者の気道上皮細胞（AEC）ではTSLP mRNAレベルが上昇しており（12）、TSLPの過剰発現はマウスで実験的な喘息を誘発する（13）。幼児におけるライノウイルス（RV）感染は、TSLPレベルの上昇と関連していることが判明した（14）。さらに、respiratory syncytial virus (RSV) とmetapneumovirus (MPV) の感染は、それぞれin vitroとin vivoでAECsにおけるTSLPの産生を誘導する(15, 16)。

IL25はまた、2型サイトカインの発現を誘発し、2型自然免疫リンパ球（ILC2細胞）を活性化し、アレルギー性喘息を誘発するが、これらはすべてその受容体であるIL17RBに依存している（17-19）。TSLPと同様に、IL25の過剰発現はマウスに喘息様疾患を誘発する(20, 21)。さらに、喘息患者から培養したRV感染上皮細胞は、IL25の産生能が高い（22）。確立されたアレルギー性気道炎症モデルマウスを用いて、ライノウイルスに感染すると、IL25の産生が増加し、好酸球、好中球、好塩基球の浸潤、粘液の分泌、2型サイトカインの産生が増加することが示された。重要なことは、IL17RBに対する抗体で処理すると、これらの効果が中和されたことである(22)。

喘息のゲノムワイド関連研究では、サイトカイン、サイトカイン受容体、および関連タンパク質をコードする遺伝子の変異との関連が確認されているが［例えば、IL13、IL4、IL33、IL1RL1、IL1RL2、IL18R1、TSLP；Demanisら（23）参照］、2型サイトカインの過剰生産およびウイルス感染との相互作用に関する遺伝子変異の検討は、特定の喘息機構に対する洞察をもたらすと考えられる。ここでは、学齢期のアレルギー性喘息の危険因子としての2型サイトカイン関連遺伝子（すなわちIL4、5、13、25、33、37、IL17RB、CRLF2、TSLP）の変異体について遺伝子ベースの解析を行い、幼児期の特定のウイルス感染症との相互作用を検討する（表1）。我々は、2型サイトカイン関連遺伝子の変異が、ウイルスによる早期喘鳴の起こりやすさや学童期のアレルギー性喘息の発症に関連し、そのような関連は特定のウイルス感染症との相互作用を示す可能性があると仮定している。

表1
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表1 選択した候補遺伝子と2型反応におけるその役割の説明。

方法
研究対象者
研究対象者は、気道感染症で入院した小児の前向き、地域、人口ベースの監視コホート（The St Olav Hospital Airway Project Cohort）（29-31）から募集された。本追加研究の対象者は、2006年から2012年の間に入院し、鼻咽頭分泌物（NPS）を17種類のウイルスについて社内ポリメラーゼ連鎖反応（PCR）でルーチンに検査した者であった。追跡調査の対象基準は、小児専門医療に紹介された生後2年以前の下気道感染症、または手術患者からなる当初の対照群の子どもで、下気道ウイルス感染症の曝露がないことである（ウイルス感染症の分類方法の詳細は、主効果の項を参照）。すべてのジャーナルは研究訪問後に修正され、2名の被験者は曝露時に細菌性肺炎を発症していたため除外された。

本研究は、医学研究倫理に関する地域委員会の承認を得た（REK番号2016/540）。学齢期の臨床的フォローアップのためのインフォームドコンセントを収集し、遺伝子解析のための同意も含めた。

研究プロトコール
入院時のデータはプロスペクティブに収集した（29-31）。生後6年以降のフォローアップは、研究のために組織的に設定されたもので、日常診療の一部ではない。子どもの診察とデータ収集は、2017年3月から2019年6月の間にSt Olav病院の研究施設病棟で行われ、小児喘息専門医が訓練を受けた研究用看護師とともに、ウイルス曝露について盲検化された両者によって主導された。研究訪問には、肺機能検査、局所麻酔後の血液サンプル採取、研究用小児科医による体系的な病歴聴取と臨床検査が含まれた。小児喘息とアトピーの病歴に関するThe International Study of Asthma and Allergies in Childhood Questionnaires (ISAAC) (32) に基づく、介護者用のデジタル質問票を作成した。

肺機能検査
肺機能は、Vyntus Pneumo APSスパイロメーターを用いて、確立されたガイドライン（33、34）に従って測定された。測定結果は、年齢、身長、性別のEU標準データに従って、絶対値および予測値に対する割合の両方で得られた。最初のベースライン流量-体積測定後、すべての小児は、最終的な気管支過敏反応を測定するためにメタコリン誘発試験（MPT）を考慮した。MPTの禁忌は、気道感染、抗生物質治療の継続、過去2週間の喘息増悪、FEV1＜70％、気道閉塞の臨床症状、再現性のある繰り返しスパイロメトリーを実施することが技術的に不可能な場合であった。MPTテストは、吸入同期式投与ネブライザーを用いて実施された。試験方法は、FEV1が20％低下するまで、または最大累積投与量1,447mgまでメタコリンの投与量を倍加させるというものであった。すべての小児は、スペーサー（フィリップス・レスピロニクス社のオプティチャンバー・ダイアモンド）を介してサルブタモール0.4mg（ベントリン）を吸入した後、スパイロメトリーで肺機能可逆性試験を終了した。

表現型の定義
アレルギー性喘息の診断には、最近のガイドラインに基づく喘息の臨床診断と、検査基準の1つ（35）の両方が必要であった。臨床的喘息は、1）既往歴に1つ以上の典型的な喘息症状があり、研究訪問時に可変呼気気流制限がある、または2）小児科専門医によって診断された最近の喘息で研究訪問時に吸入コルチコステロイドによる治療を継続している場合に診断された。喘息症状は、夜間の咳、ウイルス感染時の14日以上の長引く咳、運動による胸部圧迫感、喘鳴、息切れのいずれか、またはメタコリン試験で気流制限を誘発する際にこれらの症状が認められることと定義された。気流制限の変動または可逆性は、メタコリンチャレンジ中にFEV1が20％以上低下するか、スパイロメトリーのみ実施した場合は、サルブタモール吸入後にベースラインスパイロメトリーと比較してFEV1が12％以上増加することと定義した。実験室基準は、アレルギー感作（試験した11の航空アレルゲンまたは6の食物アレルゲンのいずれかに対する特異的IgE > 0.35 kU/L）または血中好酸球数≥300 cells/µLと定義された。

塩基配列の決定
これらの被験者のうち111人について配列データが作成された。9つの候補遺伝子（すなわちIL4, 5, 13, 25, 33 and 37, IL17RB, CRLF2 and TSLP）について、すべてのエクソン、イントロン/エクソン境界、アップストリームおよびダウンストリーム制御領域を捕らえるために配列決定が行われた。ライブラリプレップはAmpliSeq for Illumina custom DNA panel (Illumina Inc., CA) を用いて行った。このパネルには、平均244 bpのアンプリコン長で、合計28,546塩基対（27,076塩基）をカバーするアンプリコン（2プール分）が含まれていた。簡単に言うと、5 ngのDNAを18サイクル（99℃ 15秒、60℃ 4分）の2つのターゲットPCR増幅反応（各アンプリコンプールの1つ）の入力として使用した。次に、FuPa試薬を用いてプライマー二量体を消化し、アンプリコンを部分的に消化した。次のステップでは、デュアルサンプルインデックスが加えられた。次に、Mag-Bind® TotalPure NGS (Omega Bio-tek, Inc., Georgia, GA, USA) を用いてアンプリコン生成物をクリーンアップし、フリープライマーやプライマーダイマー種から特定のアンプリコンを精製した。その後、Mag-Bind® TotalPure NGS (Omega Bio-tek, Inc., Georgia, GA, USA) を用いた2度目のクリーンアップの前に、Illuminaプラットフォームでのシーケンスに十分な量のライブラリを増幅する第2の増幅ステップを実行した。最後に、バイオアナライザー（Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA）で Agilent High Sensitivity DNA Kit を用いてライブラリーのバリデーションを行いました。

ライブラリーは8 pMに正規化されてプールされ、2台のMiSeq V3フローセルでクラスタリングが行われた。最後に、製造元の説明書に従って、MiSeq装置（Illumina, Inc.、米国カリフォルニア州サンディエゴ）で2X150サイクルのペアエンドリードシーケンスを行った。塩基呼称は、RTA v1.18.54によってMiSeq装置上で行われた。FASTQファイルは、bcl2fastq2変換ソフトウェアv2.17 (Illumina, Inc. San Diego, CA, USA)を用いて生成した。

配列データのアライメントと品質フィルタリング
Atropos (v. 1.1.18, flags -q 15 and -m 15) を用いて、配列アダプターおよび低品質リードを除去しました。BWA MEM (v. 0.7.15, flags -M and -v 2) を用いて、ヒトゲノム (hg38) に対してアライメントを行った。BAMファイルをソートし、リードグループ情報を付加した後、Picard tools (v. 2.18.5) のAddOrReplaceReadGroups, CleanSam, MarkDuplicates (OPTICAL_DUPLICATE_PIXEL_DISTANCE = 2500, CREATE_INDEX = TRUE) によりクリーニング、ソフトクリップ、重複リードのマーク付けを実施しました。GATK (v. 4.0.4.0) の BaseRecalibrator と ApplyBQSR を用いて、既知の変異部位 (dbSNP v. 151 と Mills、GATK resource bundle の 1000G gold standard) から Base Quality score を再キャリブレーションしました。その後、GATKのHaplotypeCallerを用いて各サンプルに対して個別にバリアントをコールし、得られた全てのgvcfファイルをGATKのCombineGVCFsでマージし、GATKのGenotypeGVCFs（-G StandardAnnotation）を用いてジョイントファイル上でバリアントをコールしました。コールされたSNVとインデルを別々に処理し、「GATKのVariantFiltration」を用いて、QD < 2.0, FS > 60.0, MQ < 40.0, MQRankSum < -12.5, ReadPosRankSum < -8.0 のSNVと、QD < 2.0, FS > 200.0, ReadPosRankSum < -20.0 のインデルを残して高品質変異体をろ過しました。

被験者の品質管理
バリアントコールと初期品質管理の後、被験者ごとのコールレートを調べ、すべてのバリアントで低品質のデータが示された被験者がいるかどうかを判断しました。対象者全員（N=109）が350のバリアントに対するコール率が85%以上であったため、全員が解析に含まれた。

SNP品質管理およびアノテーション
シークエンスによって同定されたすべてのバリアントのうち、350個はUCSC GTEx Gene V8によって9つの遺伝子にアノテーションされた（遺伝子の開始および停止部位から20kb以内）。コール率90％未満のバリアント（N=41）を除外し、さらにハーディーワインバーグ平衡のP値<10-4（N=5）を除外し、304バリアントを解析対象として残した。含まれるバリアントはANNOVAR（36）により機能アノテーションを行った（補足表S1）。

主効果
主解析では、アレルギー性喘息の症例／コントロールの状態との関連性を調べた。遺伝子ベース解析は、関連解析の統計的検出力を向上させるために、1つの遺伝子またはゲノム領域内の含まれるすべてのSNPsの情報を統合するものである。遺伝子ベース解析は、SKAT（37）を用いて、すべてのパラメータをデフォルト値として実施した。サンプルサイズが2000未満の場合、SKATは自動的にsmall sample size adjustmentを適用する。バイナリーアウトカムの場合は、ハーディーワインバーグ平衡に基づいて欠落した遺伝子型の値をインプットする。共変量は年齢と性別を含む。ウイルス感染症は5つのカテゴリーに分類した。1）RSV単独感染、2）RV単独感染、3）MPV単独感染またはRSV、RV、ボカウイルス（BoV）以外のウイルスとの併用、4）混合感染（RSV、RV、MPV、BoVと他のウイルスを含む共感染）、5）ウイルス感染なし、の5つに分類した。解析では、ウイルス感染を調整するためにダミーコーディングを使用した。研究ごとの統計的有意性は、9つの遺伝子についてα = 0.05 (p<0.05/9 = 0.0056) でボンフェローニ補正し、p <= 0.05 で名目上の有意性とした。

SNPレベルの関連性検定はコマンド「SKATBinary_Single」を用いて実施し、p値を算出した。各SNPの効果の方向性を計算するために、ロジスティック回帰を実行した。

感度解析
サンプルサイズが小さいため、様々なパラメータに対する結果の頑健性を検証するために、いくつかの感度分析を行った。1）SKAT-Oは分散成分検定と負荷検定の両方を組み合わせるので、SKATの代わりにSKAT-O（38）法を適用した、2）マイナーMAF＜5％の低頻度変異のみを分析した、3）各ウイルスカテゴリーを表す5つの指標変数をダミーコード化してそれぞれを調整する代わりに、個人がウイルス性気管支炎にさらされたか（ウイルスカテゴリー1～4）、そうではなかった（ウイルスカテゴリー5）ことを示す一つの二項共変数にこれを統合した、。

相互作用解析
Rパッケージ「iSKAT」（39）を用いて、特定のウイルスタイプ、ライノウイルス、RSV、MPVと、9つの遺伝子ベースのバリアントセットのそれぞれとの間の相互作用を検証した。ライノウイルス、RSV、MPVについては前述の分類を利用し、相互作用に含まれない他のウイルス分類についてはダミーコーディングで調整した。また、年齢と性別は各モデルに共変量として含めた。すべてのパラメータはデフォルト値であった。

結果
追跡調査に来た参加者は135名で、そのうち遺伝子解析が可能な子供は109名であった。表2は、彼らの臨床的特徴を示している。追跡調査時の年齢は6〜13歳で、女性は41名（38％）であった。RSV群から42人、RV群から22人、MPV群から14人、混合感染群から13人、気管支炎に曝露されていない18人であった。アレルギー性喘息の定義に合致したのは21人（19％）で、いずれも軽度の喘息に相当する。予想通り、RV気管支炎に暴露された小児は、そうでない小児（18％）よりもアレルギー性喘息が多い（29％）、RSV群では逆であった（アレルギー性喘息あり19％対なし43％）。

表2
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表2 臨床的特徴の研究対象者。

9つの候補遺伝子のターゲットシークエンシングを行い、各遺伝子におけるすべての潜在的バリアントを同定した（N=350バリアントで品質管理を通過したのは304個［方法参照］）。ANNOVAR（36）により9つの遺伝子のそれぞれに注釈されたすべてのコーディングバリアントを用いて、バリアントセットのそれぞれについて集約的な遺伝子ベースの解析を実施した。9つの遺伝子に基づくバリアントの集合体のそれぞれについて、アレルギー性喘息の症例／対照の状態との関連を調べた。年齢、性別、5つのウイルスカテゴリーで調整した後、IL33は名目上の有意性を獲得した（P = 0.017、表3）。サンプル中、IL33は37のコーディングバリアントを含んでいたが、304のバリアントすべてについて調整した後、単一のバリアントはいずれも統計的有意性を達成しなかったが、5つは名目上の有意性（P＜0.05）を達成し、そのすべてがマイナーアレルとアレルギー性喘息のリスク増加との関連性を示した（表4）。

表3
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表3 SKATを用いた遺伝子ベースの関連性結果。

表4
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表4 IL33の単一バリアントの結果。

IL33遺伝子に基づく関連が、変異体、被験者、解析方法に関する異なる包含/除外基準に対して頑健であるかどうかを検証するために、一連の感度解析を行った（表5）。すべての感度解析は名目上有意であり、結果はこれらの包含/除外基準に対して頑健であることが示された。さらに、低頻度のバリアント（MAF < 5%）に限定しても同じp値（p=0.017）が得られ、低頻度のバリアントが一般的なバリアントではなくIL33のシグナルを駆動していることが示された。

表5
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表5 感度解析の結果（P値）。

遺伝子ベースのバリアントセットと相互作用して喘息のリスクを変化させている可能性のある特定のウイルスタイプとの相互作用を特定するために、遺伝子-ウイルス解析を実施した。IL17RBのバリアントセットは、MPV感染と名目上有意な相互作用を示した（p＝0.050；表6）。

表6
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表6 遺伝子×ウイルス相互作用解析結果（P値）。

考察
学齢期に詳細な表現型と臨床データを収集した、よく説明された気管支炎コホートの子供とその対照群を用いて、遺伝子IL33の喘息との名目上の関連を検出することができた。さらに、サンプル数が少ないにもかかわらず、MPV感染とIL17RBの変異体との名目上有意な相互作用を検出することができた。これらは、より大きな研究サンプルで確認する必要があり、喘息発症に寄与する遺伝子-ウイルス相互作用に関する増加する文献に貢献する有望な知見である。

2型サイトカイン過敏症は、ライノウイルス（40）、RSV（41）、MPV（42、43）感染後の喘息および気管支炎の両者の特徴である。したがって、サイトカインとその受容体をコードする遺伝子内の変異体を調べ、ウイルス感染と喘息リスクとの相互作用における潜在的な役割を確認することが必要である。以前の研究では、喘息感受性とIL17RBの変異体（44）およびIL33の変異体との関連が確認されたが、これも多様な家系にわたって関連があった（45, 46）。

IL33は多くのTh2サイトカインの発現を誘導し、好酸球性炎症を増加させる。IL33のまれな機能喪失型変異体は喘息に対して保護的であることが示されている(8)。我々の解析では機能喪失バリアントは含まれていなかったが、このことは喘息の病因において低頻度・稀なバリアントが重要である可能性をさらに示している。IL33の解析に含まれる変異体は、喘息発症のリスクを増加させたり減少させたりするが（表4）、マイナーアレルがウイルス曝露後の関連組織でIL33の発現を増加させたり減少させたりするかどうかはまだわかっていない。

IL17RBは、IL17BとIL25（IL17E）に特異的なサイトカイン受容体インターロイキン17受容体Bをコードしている。IL17ノックアウトマウスは、MPV感染後の炎症反応が低いようである(42)。さらに、イントロンのIL17RB変異体（+5561G>A）の証拠があり、マイナーアレルが喘息に対して保護的で、IL17RBの発現低下と関連している(44)。これらの観察を総合すると、IL17RB発現を増加させる遺伝的変異は、特に呼吸器感染症にさらされた人において、喘息のリスクを増加させる可能性があることが示唆される。

喘息に関する遺伝子-ウイルス相互作用の先行研究とは異なり、我々は、選択した候補遺伝子のコーディング領域におけるすべての変異を同定するために、配列ベースのアプローチを選択した。私たちの主な解析は、各遺伝子にアノテーションされた変異体を個別に調べるのではなく、すべての変異体を集約して行った。IL33の結果は、この遺伝子内のいくつかの単一バリアントは喘息と名目上関連するが、単一バリアントが集約された場合と同じレベルの統計的有意性を達成することはないことを示している。IL33遺伝子の変異体の効果の方向がリスクと防御の間で比較的均等であったため、分散成分に基づく方法を用いて集約した変異体を解析することで、関連を検出する力が高まったのである。さらに、感度解析の結果、IL33と喘息との間の遺伝子ベースの関連は、低頻度のバリアント（MAF <5%）によってもたらされており、このバリアントを個別に用いて関連を検出する力はなかった。

残念ながら、残りの8つの候補遺伝子は、すべてこの表現型の強力な候補遺伝子であるにもかかわらず、アレルギー性喘息との間の関連シグナルは検出されなかった。これは、主にコーディング領域と調節領域に焦点を当てたシーケンス戦略によるもので、以前の遺伝学的研究で同定されたタグとなる遺伝子変異の多くを見逃す可能性があるためと考えられる。さらに、これらの遺伝子の多くで関連性を検出するには力不足であった可能性がある。

これらの結果は、ウイルス感染と遺伝的な遺伝子変異の両方が喘息リスクの増加に寄与しており、喘息リスクの多因子性を浮き彫りにしている。IL33とIL17RBの両方について示された結果は統計的に有意であり、治療薬の設計や早期スクリーニングのターゲットとなり得るが、これらの結果は独立した研究において再現されなければならない。また、喘息リスクに対する遺伝的影響が特定の治療反応に依存するかどうかを判断するためには、さらに研究を進める必要があり、この問題にはより大きなサンプルサイズが必要である。

データの利用可能性に関する声明
本論文で紹介したデータセットは、ノルウェーの法律により、遺伝子配列データを含む機密データの共有が制限されているため、容易に入手することはできません。データセットへのアクセスは、Kari Risnes博士とAndrew DeWan博士までお願いします。

倫理に関する声明
本研究は、医学研究倫理に関する地域委員会（REK番号2016/540）により承認されました。本研究に参加するための書面によるインフォームド・コンセントは、参加者の法的保護者/近親者から提供された。

著者による貢献
KR、IJ、ADは研究デザイン全体の構想を練った。IJ、AM、HD、KRは、臨床フォローアップとデータ収集を主導した。AMは臨床データの解析と表現型の作成を行った。ZDは遺伝子解析を行った。KR、IJ、ADが研究を監督した。ZD、AM、IJ、TJ、HD、KR、ADは結果を解釈した。ZD、AM、KR、ADは最初の原稿を作成した。最終原稿は全著者が参加し、承認した。

資金提供
ノルウェー中央部教育・研究・イノベーション連絡委員会（Samarbeidsorganet）、NTNU医学部・健康科学部、St Olav大学病院小児科医院

謝辞
AmpliSeqカスタムDNAパネルライブラリープレップおよびシーケンス解析は、ノルウェー科学技術大学（NTNU）のGenomics Core Facility（GCF）との密接な協力のもとで実施されました。シーケンシングリードの処理とアライメント、バリアントのコールとフィルタリングはNTNUのBioinformatics Core Facility (BioCore) が実施した。GCFとBioCoreはNTNUのFaculty of Medicine and Health SciencesとCentral Norway Regional Health Authorityから資金提供を受けています。研究訪問はSt. Olavs University HospitalのClinical Research Facility Wardで行われた。

利益相反
著者らは、本研究が利益相反の可能性があると解釈される商業的または金銭的関係がない状態で実施されたことを宣言する。

出版社からのコメント
本論文で述べられたすべての主張は、著者個人のものであり、必ずしも所属団体、出版社、編集者、査読者のものを代表するものではありません。本論文で評価される可能性のある製品，あるいはそのメーカーが行う可能性のある主張は，出版社によって保証または承認されたものではない．

補足資料
本論文の補足資料は、https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fimmu.2022.1054119/full#supplementary-material でオンライン公開されています。

略語
AEC、気道上皮細胞；BoV、ボカウイルス；FEV1、1秒間の強制呼気量；ILC2、2型自然リンパ球；ISAAC、小児喘息およびアレルギーに関する国際研究；MAF、マイナーアレル頻度。MPT、メタコリン誘発試験、MPV、メタニューモウイルス、NPS、鼻咽頭分泌物、RSV、呼吸同期ウイルス、RV、ライノウイルス、SNP、一塩基多型、TSLP、胸腺間質リンパポイエチン。

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  1. この論文では、「希少バリアント関連性試験のための最適な統一アプローチと少人数ケースコントロール全エクソームシーケンス研究への応用」をテーマとして、「希少バリアント関連性試験のための最適な統一アプローチと少人数ケースコントロール全エクソームシーケンス研究への応用」をテーマとする。この論文では、「希少変異との関連性検定における最適な統一手法と少人数症例対照全エクソームシークエンス研究への応用」をテーマとしています。

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キーワード：小児喘息、ウイルス性呼吸器感染症、気管支炎、2型サイトカイン、遺伝的危険因子、遺伝子-環境相互作用（G×E)

引用元 Dong Z, Myklebust Å, Johnsen IB, Jartti T, Døllner H, Risnes K and DeWan AT (2023) Type 2 cytokine genes as allergic asthma risk factors after viral bronchiolitis in early childhood. Front. Immunol. 13:1054119.論文番号: 10.3389/fimmu.2022.1054119

Received: 2022年9月26日; Accepted: 2022年12月15日
公開：2023年1月6日

編集者

ラファエラ・ネンナ（ローマ・サピエンツァ大学、イタリア
査読者：Patricia De NADAI, Sapienza University, Italy

パトリシア・デ・ナダイ（リール大学、フランス
Blanca Cárdaba、保健研究所ヒメネス・ディアス財団（IIS-FJD）、スペイン
Copyright © 2023 Dong, Myklebust, Johnsen, Jartti, Døllner, Risnes and DeWan. これは、クリエイティブ・コモンズ表示ライセンス（CC BY）の条件の下で配布されるオープンアクセス論文である。原著者および著作権者のクレジットを表示し、本誌の原著を引用することを条件に、他のフォーラムでの使用、配布、複製を許可する。本規定に従わない使用，配布，複製は認めない．

*Correspondence: Andrew T. DeWan, andrew.dewan@yale.edu; Kari Risnes, kari.risnes@ntnu.no

これらの著者はこの論文に等しく貢献し、筆頭著者を共有しています。

‡これらの著者はシニアオーサーシップを共有する

免責事項：本論文で表明されたすべての主張は著者個人のものであり，必ずしも所属組織の主張，出版社，編集者，査読者の主張を代表するものではありません．この記事で評価される可能性のある製品、またはそのメーカーが行う可能性のある主張は、出版社によって保証または承認されるものではありません。

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