オメガ3およびオメガ6由来オキシリピンの血漿レベルと若年成人における糞便微生物叢組成の関連性

哉百名

オメガ3およびオメガ6由来オキシリピンの血漿レベルと若年成人における糞便微生物叢組成の関連性

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC9736377/


Huiwen Xu, Lucas Jurado-Fasoli、[...], and Borja Martinez-Tellez
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アブストラクト
多価不飽和脂肪酸（PUFA）の酸化産物であるオキシリピンの血中濃度が腸内細菌叢の組成を調節することが前臨床試験で示唆されているが、ヒトでは情報が得られていない。そこで、本研究では、若年成人コホートにおいて、オメガ3およびオメガ6由来のオキシリピン血漿レベルと糞便微生物叢組成の関係を調査することを目的としました。80名の若年成人（74％女性、21.9±2.2歳）をこの横断的研究に組み入れた。血漿中のオキシリピン濃度は、液体クロマトグラフィー-タンデム質量分析法を用いて測定した。糞便微生物叢の組成は、V3-V4 16S rRNA遺伝子配列決定により分析した。その結果、オメガ3由来のオキシリピンの血漿レベルは、Clostridium cluster IV属（ファーミキューテス門、rho≧0.415、p≦0.009）の相対存在量とそれぞれ正の相関を示し、Sutterella属（プロテオブクテリア門、rho≧-0.270、p≦0.041）の相対存在量と負の相関を示していました。さらに、血漿中のオメガ6由来オキシリピンは、アシダミノコッカス属とファスコラクトバクテリウム属（ファーミキューテス門、いずれもrho≧-0.263、p≦0.024）、およびサッテレラ属、サクシニビブリオ属、ゲミゲル属（プロテオバクテリア門、いずれもrho≧-0.263、p≦0.024）と負の関連を有していることが示された。最後に、オメガ6とオメガ3のオキシリピンの血漿中比率は、Clostridium cluster IV属（Firmicutes phylum; rho = -0.334, p = 0.004) とButyricimonas属（Bacteroidetes phylum; rho = -0.292, p = 0.014) の相対存在量と負の関連があった。結論として、オメガ3およびオメガ6由来のオキシリピンの血漿レベルは、特定の糞便細菌属の相対存在量と関連していることが示された。
キーワード：腸内細菌叢、炎症、腸内アルカリフォスファターゼ、マイクロバイオーム、PUFAs


  1. はじめに
    2型糖尿病や心血管疾患などの慢性疾患は、通常、低悪性度の慢性炎症を伴っています[1,2,3]。このような疾患の有病率の上昇は、オメガ3系多価不飽和脂肪酸（PUFA）の摂取量が少なく、オメガ6系PUFAの摂取量が多いという特徴を持つことが多い、バランスの悪い食事に起因すると考えられています［4,5］。
    オメガ3およびオメガ6 PUFAは、リポキシゲナーゼ（LOX）、シクロオキシゲナーゼ（COX）、およびチトクロームP450（CYP450）ファミリー酵素によって酸化されてオキシリピンになることができます［6，7］。オキシリピンは、Gタンパク質共役受容体（GPCR）またはペルオキシソーム増殖剤活性化受容体（PPAR）との結合を通じて、PUFA関連作用の主要メディエーターである[6, 7]。一般に、オメガ3由来のオキシリピンは、エイコサペンタエン酸（EPA）とドコサヘキサエン酸（DHA）の両方が、炎症性メディエーターの合成を減少させ、抗炎症メディエーター（例えば、3系列のプロスタグランジン、5系列のロイコトリエン、レゾールビン、プロテクチン、マレシン）の生産を増加させるので、抗炎症作用とプロレゾール作用を示す［8，9］。一方、オメガ6由来のオキシリピンは、一般的に、炎症促進メディエーター（2系列のプロスタグランジンや4系列のロイコトリエンなど）として作用することで炎症を増加させます[9,10]。
    腸内細菌叢は、細菌が最も多い消化管に生息する微生物で構成されています[11]。ヒトでは、腸内細菌叢は主に5つのフィラで構成されています： バクテロイデーテス属、ファーミキューテス属、プロテオバクテリア属、アクチノバクテリア属、ベルコミクレビア属の5つの門で構成されています[12、13]。腸内細菌叢は、特定の細菌、腸管細胞受容体との相互作用、およびその分泌代謝物（短鎖脂肪酸など）を介して、腸管バリア透過性の維持 [14,15] と腸の炎症状態の制御に関与している [16,17]. 興味深いことに、腸内細菌叢の組成と代謝産物は、食事からの摂取量（窒素化合物、炭水化物、脂肪酸、食物繊維など）によって変化することがあります[18]。PUFA、具体的にはオメガ3 PUFAを食事から摂取すると、BacteroidetesとFirmicutesの比率、常在菌（Akkermansia muciniphila、Lactobacillus、Bifidobacteriumなど）の多様性と菌数が増加します［19］。この意味で、オメガ3系PUFAを多く含み、オメガ6系PUFAを少なく含む食事パターン（例：地中海式ダイエット）は、これらのPUFAが腸管免疫に良い影響を与えるため、部分的に腸内細菌叢の調節を介してヒトの健康状態に良い影響を与えることができる［19，20］。したがって、PUFAsの効果の主要なメディエーター（例えば、オキシリピン）と腸内細菌叢の組成との関係を研究することは、臨床的に興味深いことです。
    最近の研究では、オメガ6系PUFAをオメガ3系PUFAに変換できるFAT-1トランスジェニックマウスは、野生型（WT）マウスと比較して、Firmicutes、Bacteroides、Actinobacteria phylaの相対存在量が高いことが示されました［21］。一方、一価不飽和脂肪酸をオメガ6 PUFAに変換できるFAT-2トランスジェニックマウスは、FAT-1マウスと比較して明確な腸内細菌叢組成を示した [21]．具体的には、FAT-2マウスは、WTマウスと比較して、ビフィズス菌科（放線菌門）の枯渇が特徴的であった[22]。この研究により、オメガ6およびオメガ3 PUFAsレベルが腸内細菌叢の組成とその分泌代謝物に影響を与え、腸管透過性に影響を与え、炎症状態を軽減し、最終的に慢性疾患のリスクに影響を与えることが示されました[22]。さらに、典型的なカフェテリア食によって誘発された腸内細菌叢の異常は、肥満ラットの血漿中のオキシリピンのプロファイルを変化させた [23]。したがって、我々は、オメガ3およびオメガ6由来のオキシリピンの血漿レベルは、腸内細菌叢の組成と関連していると仮定する。本研究では、若年成人におけるオメガ3およびオメガ6由来のオキシリピンの血漿レベルと糞便中の微生物叢組成との関連について検討した。

  2. 材料と方法
    2.1. 参加者紹介
    参加者は、褐色脂肪組織活性に対する運動トレーニングの効果を評価するためにデザインされた運動ベースのランダム化比較試験（ClinicalTrials.gov ID: NCT02365129）であるACTIBATE試験［24］の一部であった。参加者は、電子媒体の広告やリーフレットで募集された。参加者は全員、座り仕事（週3日未満の中等度/厳重な身体活動が20分未満）であり、過去3ヶ月間の体重が安定していた（変化量3kg未満）ことを報告した。除外基準は、妊娠中、喫煙、抗生物質を含むあらゆる薬の服用、急性または慢性疾患であった。研究プロトコルは、ヘルシンキ宣言に従って設計されました。参加者全員がインフォームドコンセントを行い、グラナダ大学の人間研究に関する倫理委員会（n°.924）およびServicio Andaluz de Salud（Centro de Granada、CEI-Granada）により承認されました。
    本研究では、血漿オキシリピンと便中微生物組成のベースラインデータが入手可能な参加者のみを対象とした（若年成人80名、n=59女性、21.9±2.2歳）。
    2.2. オキシリピンの血漿レベルの決定
    血液サンプルは、10時間の夜間絶食後、午前8時～9時の間に採取された。すべての血液サンプルを直ちに遠心分離して血漿アリコート（抗凝固剤としてエチレンジアミン四酢酸のカリウム塩を含むVacutainer® Hemogard™チューブで得た）を得、-80℃で保存した。オメガ3およびオメガ6オキシリピンの血漿レベルは、食品医薬品局（FDA）の生物分析法バリデーションガイドライン[25]に従って検証された方法で、液体クロマトグラフィー-タンデム質量分析計（LC-MS/MS）を用いたターゲットメタボロミクスアプローチで測定されました。
    このターゲットLC-MS/MSアプローチにより、オメガ3系PUFAであるα-リノレン酸（ALA）、エイコサペンタエン酸（EPA）、ドコサヘキサエン酸（DHA）、およびオメガ6系PUFAであるリノール酸（LA）、ジホモγリノレン酸（DGLA）、アラキドン酸（AA）、アドレニック酸（AdrA）を変換して得られる酸化脂の相対定量が行われた。本法で検出されたオキシリピンと使用した内部標準を表S1に示す。各オキシリピンのピーク面積とそれぞれの内部標準のピーク面積の比が相対定量に用いられた。オメガ3由来のオキシリピン種のデータはすべて合計し、オメガ6由来のオキシリピンについても同様に行った（Table S2）。さらに、血漿オメガ6／オメガ3オキシリピン比は、血漿オメガ6由来オキシリピンピーク面積比の和を血漿オメガ3由来オキシリピンピーク面積比の和で割ることにより算出した。方法論は補足資料に詳しく記載されている。
    2.3. 糞便の採取とDNA抽出
    糞便サンプルは60mLの滅菌プラスチック容器に入れ、ポータブルクーラーで研究センターまで運び、DNA抽出まで-80℃で保存した。DNAの抽出と精製は、QIAamp DNA Stool Mini Kit (QIAGEN, Barcelona, Spain)を用いて、製造者の説明書に従って実施した。濃度と品質は、NanoDrop ND1000 spectrophotometer (Thermo Fisher Scientific, DE, Waltham, Massachusetts, USA)を用いて決定した。
    細菌16S rRNA遺伝子のV3およびV4超可変領域をターゲットとしたPCRにより、DNAを増幅した。アンプリコンは、Illumina MiSeqペアエンドシーケンスシステム（2×300nt）（Illumina, San Diego, CA, USA）を用いてMiSeq（Illumina, San Diego, CA, USA）でシーケンスした。生配列（FastQファイル）のマージとフィルタリングには、Rソフトウェア[26]の「dada2」パッケージバージョン1.10.1を使用しました。Ribosomal Data Project (RDP) [27]を用いて、系統を特定の分類学的所属に割り当てた（門から属まで）。この方法論は、補足資料に詳しく記載されている。
    2.4. 人体計測と体組成
    SECA model 799 electronic column scale and stadiometer (SECA, Hamburg, Germany) を用いて、靴を履かない標準的な服を着た試験参加者の身長と体重を測定した。二重エネルギーX線吸収測定スキャン（Hologic Discovery Wi Marlborough, MA）を用いて、身体組成、すなわち除脂肪量と脂肪量を測定した。体格指数（BMI）は、体重／身長2として計算された。
    2.5. 食生活の評価
    食事評価については、他で詳しく説明されている[28,29,30]。EvalFINUT®ソフトウェアを使用して、3回の24時間食事リコールから食事摂取量（エネルギーおよび栄養摂取量）を評価した［28,29,30］。24時間食事リコールは、3つの別々の日（すなわち、平日2日と週末1日）に、資格と訓練を受けた管理栄養士による対面面接で実施された。2人の管理栄養士は、すべてのインタビューから得られたデータを独立してソフトウェアに導入した。食品頻度消費は、食品頻度質問票（FFQ）[31]を用いて評価され、参加者は過去3ヶ月間に各食品をどのくらいの頻度で消費したかを、一般的に使用されるポーションサイズを用いて回答した。
    2.6. 統計解析
    サンプルサイズの推定と検出力の計算は、ACTIBATE試験[24]の主要アウトカムに基づくものである。本研究は、そのベースラインデータを用いた二次解析に基づくものである。したがって、本研究では、特定の検出力計算やサンプルサイズの推定は開発されなかった。
    記述的パラメータは、平均値と標準偏差で示した。まず、D'Agostino & Pearson 検定を用いてデータの正規性をチェックした。血漿中のオキシリピン濃度および便中微生物組成のパラメータが非正規分布であるため、すべての解析はノンパラメトリック検定を用いて実施した。
    オメガ3およびオメガ6由来のオキシリピンの合計およびオメガ6/オメガ3オキシリピン比と、門および属分類レベルでの糞便微生物叢組成との関係を調べるために、Rソフトウェアの「psych」パッケージおよび「corrplot」パッケージを使用してスピアマン相関分析を採用しました。ボルケーノプロットは、GraphPad Prismソフトウェア（GraphPad Software, San Diego, CA, USA, version 8.0.0）を用いて、これらの相関を描写するために使用した。次に、各オメガ3およびオメガ6オキシリピンの血漿レベルと特定細菌微生物叢との関係を調べるために、Rソフトウェアの「psych」および「corrplot」を用いて、スピアマン相関分析を行った。ヒートマッププロットは、Rソフトウェアの「Gplot」パッケージを使用して、これらの相関を表現するために使用した。最後に、部分スピアマン相関をBMI、総PUFAs、魚の摂取量で調整した。有意水準は、p＜0.05とした。

  3. 結果
    3.1. 研究参加者の特徴
    表1は、研究参加者（女性74％、21.9±2.2歳）の記述的特徴である。
    表1
    研究参加者の特徴
    3.2. オメガ3オキシリピンの血漿レベルは、Clostridium Cluster IVおよびSutterella属の相対的存在量と関連する
    門レベルでは、オメガ3系オキシリピンの血漿レベルの合計と糞便微生物叢組成との間に関連は認められなかった（すべてp＞0.05；図1A-D）。しかし、属レベルでは、オメガ3およびDHA由来のオキシリピン（表S3）の両方の血漿レベルの合計は、Clostridium cluster IV（Firmicutes門；rho ≥ 0.415, p ≤ 0.009; 図1E、H）の相対存在量と正の関連があった。さらに、オメガ3、ALA、EPA、DHA由来のオキシリピンの血漿総量は、Sutterella属（Proteobacteria phylum; rho ≥ -0.270, p ≤ 0.041; Figure 1E-H） の相対的存在度と負の相関があった。
    図1
    オメガ3系オキシリピンの血漿レベルと糞便微生物群の門・属レベルの相対的存在量との関連をボルケーノプロットで示す。オメガ3系（A,E）、ALA系（B,F）、EPA系（C,G）、DHA系（D,H）のオキシリピンの総量を計算したところ ...
    個々のオメガ3オキシリピンDPA、DHA、8-HDoHE、13-HDoHEおよび19,20-DiDHPAの血漿レベルは、Clostridium cluster IV属の相対存在量と正の相関があった（すべてのrho≥0.314、p≤ 0.018; Figure S1A）。逆に、ALA、EPA、5-HEPE、DHA、4-HDoHEおよび19,20-DiDHPAの血漿レベルは、Sutterella属の相対的存在率と負の相関を示した（すべてのrho≥-0.338、p≤0.042；図S1B）。これらの関連は、BMI、PUFA、魚の摂取量を調整した後も有意であった（表S3、S4）。
    3.3. オメガ6オキシリピンの血漿レベルは、ファーミキューテス属とプロテオバクテリア属の相対的な存在量と負の相関がある。
    門レベルでは、オメガ6、LA、DGLA由来のオキシリピンの血漿中総量は、バクテロイデーテスの相対的存在量と負の相関を示した（いずれもrho≧-0.274、p≦0.040；図2A-C）が、AdrA由来のオキシリピンの血漿中総量はプロテオブacteriaの相対的存在量と負の相関があった（rho = -0.284 、p = 0.013； 図 2E）。しかし、LA由来のオキシリピンの血漿中総量は、Verrucomicrobia門の相対的存在量と正の相関があった（rho = 0.255, p = 0.022; Figure 2B）。属レベルでは、オメガ6、LA、DGLA由来オキシリピンの血漿中総量は、Acidaminococcus属とPhascolarctobacterium属（Firmicutes門；いずれもrho≧-0.326、p≦0.034；図2F-H）の相対的存在度と負の相関を示すことが判明した。また、血漿中のオメガ6、DGLA、AA、AdrA由来のオキシリピンの総量は、Sutterella属、Succinivibrio属、Gemmiger属（Proteobacteria phylum; all rho ≥ -0.258, p ≤ 0.042; Figure 2F-J） の相対量と負の関連があることが確認された。同様に、DGLA由来オキシリピンの血漿総量は、Odoribacter属（Bacteroidetes phylum; rho = -0.246, p = 0.028; Figure 2H）の相対存在量と負の相関があった。
    図2
    血漿中のオメガ6系オキシリピン濃度と糞便微生物群の門・属レベルの相対量との関連性を示すボルケーノプロット。オメガ6系（A,F）、LA系（B,G）、DGLA系（C,H）、AA系（D,I）、AdrA系（E,J）のオキシリピンの総量 ...
    オメガ6系オキシリピンLA、DGLA、AA、5-HETEおよびAdrAの血漿レベルは、Sutterella属の相対存在量と負の相関を示した（すべてのrho≧-0.313、p ≦ 0.027; 図S1B）。これらの関連はすべて、BMI、PUFA、魚の摂取量を調整しても有意なままであった（表S3、S4）。
    3.4. 血漿オメガ6/オメガ3オキシリピン比は、Clostridium Cluster IVおよびButyricimonas Generaの相対的存在量に負の相関がある。
    門レベルでは、血漿中のオメガ6/オメガ3オキシリピン比と糞便微生物叢組成との間に関連は認められなかった（すべてp>0.05；図3A）。一方、属レベルでは、オメガ6/オメガ3オキシリピン比は、BMI、PUFA、魚の摂取量とは独立して、Clostridium cluster IV（Firmicutes phylum; rho = -0.334, p = 0.004; 図3B）およびButyricimonas属（Bacteroidetes phylum; rho = -0.292, p = 0.014; 図3B）の相対存在度と負の関連性を示した（表S3）。
    図3
    血漿中のオメガ6/オメガ3オキシリピン比と糞便微生物組成の門レベル（A）および属レベル（B）の相対存在量との関連を示すボルケーノプロットである。X軸はスピアマンの相関係数、...を表す。

  4. ディスカッション
    本研究では、血漿中のオキシリピン濃度が若年成人の糞便微生物叢組成と関連していることを示すものである。具体的には、血漿中のオメガ3系オキシリピン濃度は、Clostridium cluster IVの相対的存在量と正の相関を示し、Sutterella属の相対的存在量と負の相関を示しました。また、オメガ6系オキシリピンの血漿レベルは、いくつかの属の相対的存在量と負の相関があった。一方、血漿中のオメガ6/オメガ3オキシリピンの比率は、Clostridium cluster IVおよびButyricimonas属の相対的存在量と負の相関があった。これらの結果は、オメガ3およびオメガ6由来のオキシリピンの血漿レベルが、若年成人における腸内細菌叢組成の相対存在量、あるいはその逆を調節している可能性を示唆している。
    血漿中のオメガ3由来オキシリピン濃度およびオメガ6/オメガ3オキシリピン比は、Clostridium属、Eubacterium属、Ruminococcus属、Anaerofilum属からなるClostridium cluster IV属の相対存在量とそれぞれ正および負の相関を示すことを見出した。同様に、オメガ6をオメガ3PUFAに変換できるFAT-1マウスも、WTマウスと比較してClostridium cluster IV属の相対的な存在量が高いことを示した[21]。クロストリジウムクラスターIV属菌は、酪酸などの短鎖脂肪酸の産生を介して抗炎症作用を発揮し、腸の健康を維持することが示されている[32]。これらの知見は、オメガ3由来のオキシリピンの血漿中濃度が高いほど、酪酸を産生し、最終的に腸管バリア機能と免疫力を高めるClostridium cluster IV属の相対存在量が増加し、全身および腸の健康を改善する可能性を示唆しています [33]. 一方、腸内細菌叢はオメガ6オキシリピンの産生に影響を与え、マウスにおける高脂肪食誘発性肥満と脂肪組織炎症に対する宿主の抵抗性を付与する [34]．上記の前臨床研究は、今回のヒトコホートで確認され、オメガ3 PUFA、特にそのオキシリピンがヒトの健康に与える臨床的な恩恵を補強しています。
    さらに、血漿中のオメガ3およびオメガ6オキシリピンレベルは、糞便中のSutterella属の相対的存在量と負の相関があることが確認された。これらの結果と同様に、オメガ6 PUFAであるLAを豊富に含む飼料を10週間摂取したラットは、Sutterella属の相対存在量の減少を示しました[35]。一方、オメガ3系PUFA（すなわち、4gのEPAとDHA）を8週間毎日経口補給すると、中高年の健康なヒトの糞便中のSutterellaceae科の相対存在量が増加した[36]。8週間の洗浄期間の後、Sutterellaceae科の相対的な存在量はベースラインレベルに戻りました[36]。これらの研究は、オメガ3またはオメガ6 PUFAを補給することで、腸内の特定の細菌の相対的な存在量が調節できることを示しています。この効果は、PUFAとその下流のオキシリピンが腸のブラシボーダー膜の脂肪酸組成を変更し、小腸の腸アルカリホスファターゼ（IAP）活性を増加させることから、腸における食事のPUFAの直接効果によって説明できるかもしれません［37、38］。したがって、オキシリピンは、そのPUFA前駆体と同様にIAP活性を調節する可能性があると仮定する。この点に関して、オメガ3系PUFAの補充［21］とオメガ6系PUFAの過剰生産［39］の両方が、腸細胞からのIAPの放出を誘導することが示されており、レゾルビンの調節（すなわち、 オメガ3系オキシリピンに由来する抗炎症/解決カスケードの遠位メディエーター）[40]、または特定の細菌（例えば、リポ多糖［LPS］を産生するSutterella属［22］）の相対存在量の増加によって、腸細胞からのIAPの放出を誘導することが示されている。IAPはLPSを脱リン酸化し[41]、LPSがToll様受容体4（TLR4）に結合するのを防ぎ[41]、結果として炎症カスケードの活性化を回避する[41]。腸内細菌叢は炎症に応答してオキシリピンのレベルに寄与する可能性があるため[23]、他の炎症メディエーターと同様に、血漿オキシリピンが腸内腔に移動する可能性があると考えられる。したがって、オメガ3およびオメガ6オキシリピンの血漿レベルとSutterella属の相対的存在量との間に観察された関係は、ヒトにおけるIAP活性の調節によって部分的に説明できるかもしれない。この仮説は前臨床試験に基づくものであるが、今後特に設計された試験で検討されるべきである。しかし、今回の結果は、これらの特定の細菌とオメガ3およびオメガ6オキシリピンの関係を、ヒトで初めて記述したものである。オキシリピンはPUFAの生理作用の主要なメディエーターであり、主に炎症および免疫反応を制御するため、今回の結果は臨床的に非常に興味深いものである。
    限界と長所
    本研究には以下の限界がある：横断的な研究デザインであるため、因果関係を確立することはできない。本研究では、具体的なサンプルサイズと検出力の計算が行われていないため、結果は慎重に解釈されるべきである。このアプローチは仮説生成であり、FDRを調整すると、潜在的に意味のある知見を過剰に修正する可能性があるため、解析は偽発見率（FDR）で制御されていない。最後に、これらの結果は新たな仮説を生み出すものであるが、血漿中のオキシリピンが糞便中の微生物叢の構成に影響を与える可能性があり、その逆もしかりであるため、血漿中のオキシリピンと糞便中の微生物叢とのクロストークの方向性を明らかにするためにはさらなる研究が必要となる。一方、本研究の大きな強みは以下の2点である： (i)最新の技術（Illuminaプラットフォーム）を用い、操作上の分類単位の代わりにアンプリコン配列の変異を使用するDADA2プログラムを用いてDNA配列を決定した[42]、(ii)RDPが属分類までのアノテーションステップを行い、アノテーション誤差が10％未満である手法を用いた[43]。

  5. 結論
    本研究により、血漿中のオメガ3系オキシリピンは、Clostridium cluster IV属の相対的存在量と正の相関があることが明らかになった。一方、血漿中のオメガ3およびオメガ6オキシリピンは、若年成人の糞便サンプル中のSutterella属の相対的存在量と負の相関があることがわかった。これらの結果は、オメガ3およびオメガ6オキシリピンの血漿レベルがヒトの腸内細菌叢の組成を調節することを示唆していると考えられる。オメガ3およびオメガ6オキシリピンがヒトの健康に及ぼす影響が知られていることから、今回の結果は、これらのオキシリピンがヒトの腸管バリア機能の調節に関与している可能性を示唆しています。しかし、今後の研究では、腸内細菌叢の健康状態におけるオメガ3およびオメガ6の補給の影響や、血漿中のオキシリピンと腸管バリアの調節に対するさまざまなプロバイオティクスの効果について検討する必要があります。
    謝辞
    本研究は、スペイン・グラナダ大学のバイオメディシン博士課程で行われた博士論文の一部である。著者らは、MIRACUMの支援を受け、ドイツ連邦教育研究省（BMBF）（FKZ 01ZZ1801H）の助成を受けて、データ解析のソリューションをローカルで提供してくれたUniversity Medicine Magdeburgのデータ統合センターチームに感謝したい。
    補足資料
    以下の補足情報は、https://www.mdpi.com/article/10.3390/nu14234991/s1、表S1：LC-MS/MSメソッドで使用した標識内部標準の概要です。表S2：検出されたオメガ3およびオメガ6オキシリピンの概要、QCサンプルで観察された変動性を含む（RSDで表現）。QCサンプルでRSD＜30％を示す分析物は、さらなる分析のために保管した。表S3： オメガ3およびオメガ6オキシリピンの総量と、属レベルでの糞便微生物組成の相対存在量との間の部分的なスピアマン相関。表S4： 個々のオメガ3およびオメガ6オキシリピンの血漿レベルと、属レベルでの糞便微生物叢組成の相対的存在量との間の部分的なスピアマン相関。図S1：個々のオメガ3（パネルA）およびオメガ6（パネルB）オキシリピンの血漿レベルとClostridium IVおよびSutterella属の相対的な存在量との間のスピアマン相関[44,45,46].
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    ファンディング・ステートメント
    本研究は、Fondo de Investigación Sanitaria del Instituto de Salud Carlos III (PI13/01393) and PTA 12264-I, Retos de la Sociedad (DEP2016- 79512-R), and European Regional Development Funds (ERDF) を通じてスペイン経済競争省から支援を受けました、 スペイン教育省（FPU16/05159, FPU16/02828, FPU17/01523, FPU19/01609）、イベロアメリカ栄養学財団（FINUT）、グラナダ大学Plan Propio de Investigación 2016-Excellence actionsによる： Unit of Excellence on Exercise and Health (UCEES)、AstraZeneca HealthCare Foundationand by Junta de Andalucía, Consejería de Conocimiento, Investigación y Universidades (ERDF, SOMM17/6107/UGR), the Chinese Scholarship Council (CSC, No. 201707060012 to XD）、Fundación Alfonso Martin Escudero、Ministerio de Universidades y la Unión Europea -NextGenerationEU (RR_C_2021_04) によるMaria Zambrano fellowship。ALは、欧州委員会の「欧州地域開発基金」（EFRE）を通じた資金、およびザクセン＝アンハルト州経済・科学・デジタル化省の「LiLife」プロジェクト（プロジェクトID：ZS/2018/11/95324）の「老後の自律」（AiA）研究グループの一部として支援を受けている。
    著者による寄稿
    H.X., L.J.-F., A.G., P.C.N.R., J.R.R. and B.M.-T. が研究の構想および設計に貢献した。H.X., L.J.-F., L.O.-A., F.J.O.-P., I.K., X.D., R.V.-V., A.L. and J.P.-D. は資料作成およびデータ収集を行った。H.X.、L.J.-F.、B.M.-T.は、統計解析を行った。最終的な内容については、J.R.R.とB.M.-T.が第一の責任を負っている。すべての著者は、出版された原稿を読み、同意している。
    インスティテューショナル・レビュー・ボード声明
    研究プロトコルと実験デザインは、ヘルシンキ宣言の最終改訂倫理ガイドラインによって適用された。本研究は、グラナダ大学の人間研究に関する倫理委員会（No.924）およびServicio Andaluz de Salud（Centro de Granada、CEI-Granada）の承認を得ている。
    インフォームド・コンセントの声明
    本研究に参加したすべての被験者からインフォームドコンセントを得た。
    データの利用可能性に関する声明
    本研究は、多数の被験者とアウトカムから構成されており、データ解釈のために特定の知識を必要とするため、合理的な要求があれば、本研究の結果を裏付けるデータを対応する著者から入手することができます。
    利益相反
    著者は利益相反のないことを宣言している。
    脚注
    出版社からのコメント：MDPIは、出版された地図や機関所属の管轄権主張に関して中立を保っています。
    記事情報
    ニュートリエンツ(Nutrients) 2022 Dec; 14(23)： 4991.
    オンライン公開 2022年11月24日. doi: 10.3390/nu14234991
    pmcid: pmc9736377
    PMID:36501021
    Huiwen Xu,1,2,† Lucas Jurado-Fasoli,1,3,† Lourdes Ortiz-Alvarez,1,2 Francisco J. Osuna-Prieto,1,4 Isabelle Kohler,5,6 Xinyu Di,7 Ramiro Vilchez-Vargas,8 Alexander Link,8 Julio Plaza-Díaz,2,9,10 Angel Gil,2,10,11,12 Patrick C. N. Rensen,13 Jonatan R. Ruiz,1,10,* and Borja Martinez-Tellez1,13,14,*.
    大草敏文 学術編集委員会
    1PROFITH (PROmoting FITness and Health through Physical Activity) Research Group, Sport and Health University Research Institute (iMUDS), Department of Physical and Sports Education, Faculty of Sport Sciences, University of Granada, 18071 Granada, Spain
    2グラナダ大学薬学部生化学・分子生物学II部、18071グラナダ、スペイン
    3グラナダ大学医学部生理学教室、18071グラナダ、スペイン
    4グラナダ大学科学部分析化学科、18071グラナダ、スペイン
    5アムステルダム大学分子生命科学研究所（AIMMS）バイオ分析化学部門、1081アムステルダム、オランダ
    6Center for Analytical Sciences Amsterdam, 1081 Amsterdam, The Netherlands
    7ライデン大学ライデン学術研究センター（LACDR）システム生物医学・薬理学部門、ライデン、2300ライデン、オランダ
    8オットー・フォン・ゲーリッケ大学マグデブルク校 消化器・肝臓・感染症科 39106 Magdeburg, Germany
    9東オンタリオ子供病院研究所、オタワ、ON K1H 8L1、カナダ
    10Instituto de Investigación Biosanitaria, ibs.Granada, 18014 Granada, Spain（グラナダ、スペイン
    11CIBEROBN, Biomedical Research Networking Center for Physiopathology of Obesity and Nutrition, Carlos III Health Institute, 28029 Madrid, Spain.
    12グラナダ大学バイオメディカル研究センター栄養・食品技術研究所、18071グラナダ、スペイン
    13ライデン大学医療センター医学部、内分泌学部門、実験的血管医学のためのアイントホーフェン研究所、2300ライデン、オランダ
    14教育科学部教育学科、アルメリア大学CERNEP研究センターSPORT研究グループ（CTS-1024）、04120 Almería, Spain
    *Correspondence: se.rgu@jziur (J.R.R.); ln.cmul@zellet-zenitram.b (B.M.-T.)
    †These authors contributed equally to this work.
    Received 2022 Oct 25; Accepted 2022 Nov 21.
    Copyright © 2022 by the authors.
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