洗浄微生物叢移植は慢性疾患貧血のヘモグロビン値を改善する

洗浄微生物叢移植は慢性疾患貧血のヘモグロビン値を改善する

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/37507843/

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ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲーション
アーリービュー e14072
原著論文
オープンアクセス
洗浄微生物叢移植は慢性疾患貧血のヘモグロビン値を改善する

https://onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1111/eci.14072

Hao-Jie Zhong、Wei-Ran Chen、Xin-Jian Lu、Dong-Xia Hu、De-Jiang Lin、Tao Liu、Lei Wu、Li-Hao Wu、Xing-Xiang He
初出：2023年7月28日
https://doi.org/10.1111/eci.14072
Hao-Jie Zhong、Wei-Ran Chen、Xin-Jian Lu、Dong-Xia Huは本研究に等しく貢献した。
研究概要
セクション

要旨
背景
慢性疾患性貧血（ACD）は2番目に多いタイプの貧血であり、有効な治療法がない。貧血患者では腸内細菌プロファイルが変化していることが報告されており、赤血球造血に影響を及ぼす可能性がある。ここでは、ACD患者の腸内微生物の特徴を調査し、洗浄微生物叢移植（WMT）を用いて腸内細菌叢を調整することがACD治療に有効かどうかを検討した。
方法
ACD患者と健常対照者の腸内細菌叢プロファイルを比較し、患者の血液学的パラメータに対するWMTの有効性を評価し、WMT治療後の腸内細菌叢の変化を分析した。
結果
ACD患者は健常対照者と比較して腸内細菌叢の濃度が低く、微生物組成と機能に差が認められた。さらに、2つの酪酸産生属Lachnospiraceae NK4A136グループとButyricicoccusの相対的な存在量は、ヘモグロビン（HGB）レベルと正の相関があり、ACD患者では対照群よりも低かった。WMTはACD患者のHGB値を有意に上昇させた。1回目、2回目、3回目のWMT後、ACD患者の27.02％、27.78％、36.37％（いずれもp＜0.05）で正常なHGB値が回復した。さらに、WMTは酪酸産生属の存在量を有意に増加させ、ACD患者で発現が上昇していた腸内微生物の機能を抑制した。
結論
ACD患者では、健常対照群と比較して腸内微生物の組成と機能に違いが認められた。WMTは、腸内細菌組成を再構築し、酪酸産生菌を回復させ、腸内細菌叢の機能を調節するACDの効果的な治療法である。
1 背景
慢性疾患性貧血（ACD）は、入院患者や慢性疾患患者に認められる最も頻度の高い貧血であり、慢性感染症、自己免疫疾患、がんなどによる免疫活性化の長期化によって引き起こされる2-4。残念ながら、ACDの根本的原因の根絶は困難であり、ACDはエリスロポエチンによる治療に反応しないため、ACD患者に対する有効な治療戦略はありません4。
造血幹細胞や前駆細胞がヒトの腸から検出されており、腸が赤血球造血に関与していることが示されている5。さらに、腸内細菌叢を調節する抗生物質やプロバイオティクスなどの介入は、鉄の吸収や骨髄の造血幹細胞の数に影響を与える9, 10。腸内細菌叢は、ACDの原因であるがん、慢性腎臓病、自己免疫疾患11-13の進行や治療にも影響を与える。したがって、腸内細菌叢を標的とすることは、ACDの治療に有望であると考えられる。
健康なドナーの糞便懸濁液を患者の消化管に投与する糞便微生物叢移植（FMT）は、腸内細菌叢のバランスを回復させる効果的な治療法である14。FMTは、中国ではクロストリジオイデス・ディフィシル感染症、過敏性腸症候群、炎症性腸疾患、がん治療の副作用（放射線腸炎や免疫チェックポイント阻害薬関連大腸炎など）など、腸内細菌叢の異常が関係する疾患の治療に用いられてきた15, 16。しかし、感染症や死亡などの重大な副作用があるため、臨床現場での使用は制限されている17。洗浄微生物叢移植（WMT）は、自動精製および洗浄プロセスに基づくFMTの改良された方法であり、自動精製システムを用いて糞便微生物叢を抽出した後、微生物叢ペレットを3回洗浄することで、FMTに関連するAEを減少させることができる18, 19本研究では、ACD患者におけるWMTの有効性を評価することを目的とした。
2 方法
研究デザインと患者
本研究は、ヘルシンキ宣言のガイドラインに従って実施されたレトロスペクティブ実臨床試験である。本研究は、広東薬科大学第一付属病院の倫理委員会により承認された（第2022-76号）。インフォームド・コンセントは、すべての患者または同意が得られない場合はその法定代理人から書面で得た。
2016年12月1日から2022年7月31日までに当院でWMTを受けた患者を本研究の対象とした。ACD患者群の主な組み入れ基準は、(1)成人のACD患者、(2)WMTを1回以上受けた患者とした。貧血なし群の主な組み入れ基準は、(1)貧血、出血、ACDの基礎的原因のいずれでもない成人、(2)WMTを1回以上受けた患者とした。ACD群の主な除外基準は、(1)鉄欠乏症、葉酸欠乏症、ビタミンB12欠乏症による貧血、急性出血、原因不明の貧血患者、(2)貧血に対する治療（鉄サプリメント、葉酸、エリスロポエチン、輸血など）を受けている患者、(3)WMT中に貧血の原因となっている慢性疾患を対象とした治療がエスカレートした患者であった。
検体採取
検便を採取するために滅菌容器が用意された。健常対照者、各WMTコース前の患者、およびWMTのための便提供者の便の内側は、排便後約10分以内に採取された。検体は糞便DNA保存チューブ（Invitek、ドイツ）に入れ、さらに処理するまで-80℃で保存した。
大腸経内視鏡的経腸チュービング法
大腸経内視鏡的腸管チュービング（TET）法は、以前に記載されたとおりに実施した20。その後、TET チューブを盲腸内に留置したまま、大腸内視鏡を注意深く引き抜いた。その後、大腸内視鏡を再び大腸に挿入し、1〜4個の内視鏡クリップを用いてチューブを壁に固定した。
WMT手順
ドナーのスクリーニングと洗浄微生物叢懸濁液の調製は既述の方法で行った21。簡単に説明すると、ドナーのスクリーニングの一環として、病歴の収集、血液検査、病原体の糞便検査を行った。便サンプルを提供する前に、ドナーは繊維質の多い食事を摂取し、1週間は高脂肪食を避けるよう求められた。ドナーには定期的な運動も奨励された。健康なドナーの新鮮な糞便サンプルは、通常の生理食塩水でホモジナイズされ、自動微生物叢精製システム（GenFMTer、FMT Medical）を用いてミクロフィルターにかけられた。その後、微生物叢ペレットを3回洗浄し、通常の生理食塩水に再懸濁した。患者には、洗浄したばかりの微生物叢懸濁液120mLを、鼻空腸チューブ（中部消化管）またはTETチューブ（下部消化管）から3日間連続で投与した。懸濁液の投与方法は、患者の病状と選択に基づいて決定された。様々な健康なドナーからの洗浄された微生物叢懸濁液が無作為に患者に割り当てられた。主に放射線療法や化学療法によって白血球減少症（白血球が4×109/L未満）を起こした患者には、WMTに関連した感染症を早期に発見するために、WMT後に発熱、下痢、腹痛などの症状を注意深く観察した。
データ収集
登録患者のWMT前後の電子カルテから、人口統計データ、肥満度、喫煙状況、飲酒、病歴、薬剤使用、WMTの適応、WMTの投与経路（中部消化管または下部消化管）、WMTのAE、WMT関連AEの治療、および赤血球（RBC）、ヘモグロビン（HGB）、網状赤血球数、平均赤血球容積、平均赤血球HGB濃度、平均赤血球HGBなどの血液学的パラメータを含むデータを収集した。
定義
アルコール依存症は、1週間のアルコール摂取量が女性で140g、男性で210gを超える場合と定義した。貧血は、HGB値が女性で120g/L未満、男性で130g/L未満の場合に診断された。貧血は、炎症の臨床的証拠（がん、感染症、免疫介在性疾患、炎症性疾患、慢性腎疾患、うっ血性心不全、慢性肺疾患、肥満、加齢、重篤な疾患を含む）とともに、鉄ホメオスタシスの基礎的な変化に基づいてACDと診断された4。WMTのAE（発熱、下痢、腹痛、疲労など）は、医師の臨床的判断に基づいて評価された。血液学的パラメータに対するWMTの影響は以下のように評価した： 血液学的パラメータ＝WMT後の血液学的パラメータ-ベースライン時の血液学的パラメータ。
16S rRNA遺伝子マイクロバイオーム解析
健常対照者34検体、WMT前のACD患者10検体、WMT後のマッチしたACD患者9検体、WMTドナー21検体の合計74検体の便をマイクロバイオーム配列決定に用いた。マイクロバイオーム16S rRNA遺伝子配列決定は、Majorbio Bio-Pharm Technology Co. Ltd.（上海）により実施された。(E.Z.N.A.®土壌DNAキット（Omega Bio-Tek社製）を用いて、製造者の指示に従って糞便サンプルから細菌ゲノムDNAを抽出した。抽出したDNAの濃度と品質は、NanoDrop 2000 spectrophotometer（ThermoFisher Scientific）を用いて測定した。16S V3-V4領域は、プライマー338F（5′-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3′）および806R（5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′）を用いたポリメラーゼ連鎖反応を用いて増幅した。アンプリコンは2％アガロースゲル電気泳動で可視化した。その後、アンプリコンをIllumina MiSeqシーケンスプラットフォーム（PE300）で配列決定した。シーケンスデータは、NCBI（National Center for Biotechnology Information）のSequence Read Archive（プロジェクトアクセッション：PRJNA 909475）に提出した。
生リードはfastp (version 0.19.6)を用いて多重化解除および品質フィルターを行い、FLASH (version 1.2.7)を用いてマージした。サンプルリードデータは、さらなる解析の前に20,000に希釈されたが、それでも平均Good'sカバレッジは99.09%であった。代表的なOTU配列の分類は、Ribosomal Database Project Classifier (version 2.2)を用いて信頼度閾値70%で解析した。微生物機能はFAPROTAXデータベースを用いて予測した。バイオインフォマティクス解析にはMajorbio Cloudプラットフォーム（https://cloud.majorbio.com）を使用した。
統計解析
検出力とサンプルサイズの計算は、virtual power and sample size calculators (http://powerandsamplesize.com/)を用いて行った。統計解析はPrism 9 (GraphPad)を用いて行った。カテゴリー変数は数値とパーセンテージで、正規分布する連続変数は平均値と標準偏差で、正規分布しない連続変数は中央値と四分位範囲で表した。帰無仮説には1標本のt検定またはWilcoxon符号順位検定を適用した。独立群の比較には、Studentのt検定またはMann-WhitneyのU検定を適宜実施した。カテゴリー変数の比較には、必要に応じてカイ二乗検定またはフィッシャーの正確検定を用いた。p値＜0.05を統計的に有意とみなした。
3 結果
健常対照者とACD患者の腸内細菌叢プロファイル
ACD患者と健常対照者の腸内細菌叢の違いの可能性を検討するため、16S rRNA遺伝子の塩基配列を決定した。ACD患者10名（年齢69.81±9.15歳、男性3名）と健常対照者34名（年齢50.65±13.11歳、男性19名）をプロファイル解析の対象とした。2群間の属レベルの分類学的プロファイルの比較を図1Aに示す。アルファ多様性分析では、ACD患者では健常対照群に比べてSobs指数、Chao指数、Ace指数が有意に低かったが、Shannon指数には顕著な差は見られなかった（図1B）。Jaccard存在量距離に基づく主座標分析（PCoA）では、ACD患者と健常対照者の腸内細菌叢組成に明らかな違いがあることが明らかになった（図1C）。健常対照者（貧血のない参加者）と比較して、ACD患者では、Faecalibacterium属、Lachnoclostridium属、Lachnospiraceae NK4A136グループおよびButyricicoccus属の相対存在量が低いなど、属レベルの相対存在量に明らかな変化がみられた（図1D）。注目すべきは、相関ヒートマップから、2つの酪酸産生属（Lachnospiraceae NK4A136グループとButyricicoccus属）の相対量がHGBレベルと正の相関があることが明らかになったことである（図1E）。FAPROTAXを用いたさらなる機能予測解析により、ACD患者ではフマル酸呼吸、亜硝酸アンモニウム化および硝酸還元経路がアップレギュレートされていることが示された（図1F）。これらの結果は、ACD患者における腸内細菌叢の組成と機能の変化を示唆している。したがって、ACDの治療オプションとして腸内細菌叢を標的とすることを目指した。
図1
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ACD患者の血液学的パラメータに対するWMTの効果
除外基準に基づき、37名のACD患者が解析の対象となった（図2）。機能性腸疾患はWMTの最も一般的な適応であり、症例の64.86％（n＝24）を占め、次いで炎症性腸疾患（n＝2）、がん治療中のAE（n＝2）であった。ACD患者では、37例、18例、11例がそれぞれ2コース、3コース、4コースのWMTを完了した。WMTの1回目と2回目、2回目と3回目、3回目と4回目の間隔の中央値は、それぞれ35.00日（32.50-40.50日）、38.00日（36.00-63.00日）、97.50日（88.25-135.75日）であった（図3A）。
図2
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表1. ベースライン時の患者の人口統計学的および臨床的特徴。
ACD（n=37）貧血なし（n=53）年齢（歳）67.00（58.00-74.00）46.00（39.00-56.00）男性、n（%）21（56.76）28（52.83）BMI（kg/m2）20.52（18.22-24. 41）（n=34）22.05（19.50-25.06）（n=53）喫煙の有無喫煙したことがない, n（%）30（81.08）47（88.68）以前, n（%）3（8.11）1（1.89）現在, n（%）4（10.81）5（9. 43)アルコール依存症, n (%)1 (2.70)2 (3.77)赤血球(1012/L)3.91(3.74-4.37)4.55±0.39HGB(g/L)115.00(110.50-121.50)139.74±11.38Ret(1012/L).04±. 02 (n = 23).05 ± .02 (n = 31)MCV (fl)91.90 (79.45-95.75)91.38 ± 3.59MCHC (g/L)323.95 ± 9.96336.74 ± 9.72MCH (pg)30.00 (24.80-31.50)30.77 ± 1.51
注：データは平均値±標準偏差、中央値（四分位範囲）、またはn（％）で示した。
略語 ACD、慢性疾患性貧血、BMI、肥満度指数、HGB、ヘモグロビン、MCH、平均赤血球ヘモグロビン、MCHC、平均赤血球ヘモグロビン濃度、MCV、平均赤血球容積、RBC、赤血球数、Ret、網状赤血球数。
図3
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1回目、2回目、3回目のWMT後、ACD患者の27.02％（37人中10人、p＜0.001）、27.78％（18人中5人、p＜0.001）、36.37％（11人中4人、p＝0.004）で、それぞれHGB値が正常に回復した。さらに定量的分析を行ったところ、ACD患者では、WMTの1回目（△HGB：2.92±7.14、p＝0.018）、2回目（△HGB：3.28±6.32、p＝0.042）、3回目（△HGB：3.73±7.21、p＝0.117）後にHGB値が徐々に上昇したが（図3B）、赤血球と網状赤血球の値には有意な変化はなかった（図3C,D）。これらの所見は、ACD患者において、WMTがHGB値の減少を止めるだけでなく、HGB値を増加させたことを示している。
ACD患者に対するWMTの効果に関連する臨床的因子
次に、ACDにおけるWMTの効果に影響を及ぼす臨床的要因を明らかにすることを目的とした。ACD患者のうち、13例が中消化管ルート、24例が下部消化管ルートでWMTを受けた。血液学的パラメータに対するWMTの効果は、異なる送達経路でWMTを受けた患者間で有意差はなかった（図4A）。
図4
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ACD患者37人のうち、13人は高齢による貧血（「高齢者貧血」と呼ばれる）であり、24人は冠動脈性心疾患、慢性腎臓病、癌、免疫介在性疾患など様々な種類の慢性疾患による貧血であった（表2）。高齢者の貧血患者と比較して、慢性疾患による貧血患者では、WMT治療後にHGB（△HGB：4.75±6.90 vs -.46±6.53, p = 0.032）とRBC（△HGB：0.15 [-.06 to 0.27] vs 0.02 [-.24 to 0.14], p = 0.047；図4B）の改善が大きかった。
表2. ACD患者における貧血に関連する主な合併症。
数パーセント（%）高齢者の貧血1335.14冠動脈性心疾患616.22慢性腎臓病38.11がん38.11免疫介在性疾患38.11感染症38.11炎症性疾患38.11慢性閉塞性肺疾患25.41肥満12.70合計37100
略語： ACD、慢性疾患の貧血。
ACD患者におけるWMT関連AE有病率
安全性のエンドポイントとして、ACD患者におけるWMT関連AEを分析した。合計105例のWMT手技が実施され、WMT関連AEは発熱1例と疲労1例を含む2例のWMT手技中に観察され、全体の有病率は1.90％であった。1例の疲労は自己限定的であり、追加治療なしで消失し、もう1例の発熱は解熱剤による治療で消失した。重篤な副作用は認められなかった。
WMT前後のACD患者の腸内細菌叢プロファイル
ACDにおけるWMT効果の潜在的機序を検討するため、WMT前後のACD患者の腸内細菌叢プロファイルを16S rRNA遺伝子配列解析により比較した。健常ドナーとACD患者におけるWMT前後の腸内細菌叢の相対的な属レベルの存在量を図5Aに示す。Sobs指数、Chao指数、Ace指数、Shannon指数に基づくα多様性解析では、統計学的に有意な差はなかったものの、WMT後のACD患者において腸内細菌叢の豊富さと多様性が向上していることが示された（図5B）。PCoAを用いたβ多様性の解析では、ACD患者ではWMT後に腸内細菌叢の組成が変化することが示された（図5C）。さらに、Escherichia-ShigellaおよびKlebsiellaを含むいくつかの有害な属は、WMT後に有意に減少した（図5D）。さらに、酪酸産生菌であるLachnospiraceae NK4A136グループとButyricicoccusは、ACD患者において有意に減少し、HGB値と正の相関を示したが（図1D,E）、WMT後に顕著に回復した（図5D）。さらに機能解析を行った結果、ACD患者（図1F）で発現が上昇したフマル酸呼吸経路と亜硝酸アンモニウム化経路は、WMT後に有意に発現が低下することが示唆された（図5E）。
図5
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キャプション
貧血のない患者の血液学的パラメータに対するWMTの影響
我々は、WMTが貧血のない患者に有害な影響を及ぼすかどうかも調べた。組み入れ基準に従って、貧血、出血、ACDの基礎疾患を持たない53人の患者が貧血なし群に登録された（図2）。これらの患者では、血液学的パラメータに対するWMTの明らかな影響は検出されなかった（図6）。
図6
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4 結論
ACD患者の腸内細菌組成と機能は、我々の解析に基づいて変化していることが判明した。WMTによる腸内細菌叢のターゲティングは、ACD患者におけるHGB値の低下を止めるだけでなく、逆転させた。この効果は特に、高齢者の貧血が原因ではないACD患者で見られた。メカニズム的には、WMTは腸内細菌叢の組成を変化させ、ACDで減少しHGB値と正の相関を示したLachnospiraceae NK4A136グループとButyricicoccusの存在量を回復させ、ACDでアップレギュレートされた腸内微生物の機能をダウンレギュレートした。さらに、WMTは安全であり、貧血のない患者のHGB値に悪影響を及ぼさなかった。我々の知る限り、これはACDにおけるWMTの治療的役割を評価した最初の臨床研究である。
貧血と腸内細菌叢との関連は広く報告されている。鉄欠乏性貧血の妊婦10名と健常妊婦10名を対象とした研究では、貧血患者の微生物組成が健常対照群と有意に異なることが示された7。同様の所見は、貧血の小児においても観察された8。しかし、ACDと腸内細菌叢の関係については十分に理解されていない。しかし、ACDと腸内細菌叢の関係についてはよくわかっていない。本研究では、ACD患者において、腸内細菌叢の減少、腸内細菌組成と機能の著しい変化が認められた。鉄欠乏性貧血の女性では、酪酸産生菌であるButyricicoccus属の存在量が健常女性よりも低いことが報告されている25。本研究でも同様の観察がなされ、ACD患者ではLachnospiraceae NK4A136グループおよびButyricicoccus属の微生物叢の存在量が減少していた。これらの結果は、腸内細菌叢がACDの病因に関与している可能性を示しており、したがって治療標的となりうる。
貧血治療における腸内細菌叢の役割の可能性は広く報告されている。9, 26 プロバイオティクス菌株Lactobacillus plantarum 299vの補給は、女性の鉄吸収を明らかに増加させた27、 28 また、プロバイオティクスのビフィドバクテリウムとラクトバチルスを用いた治療では、早期慢性腎臓病患者（推定糸球体濾過量60～45 mL/分/1.73 m2）29の血清鉄濃度が有意に上昇した。貧血モデルマウスの研究では、健常対照の糞便微生物叢を移植することで、抗生物質投与によって誘発される骨髄抑制が部分的に改善されることが明らかにされた。
次に、WMTがACDに影響を及ぼす可能性のある機序について述べる。(1)慢性疾患、加齢、微生物化合物によって引き起こされる全身性の炎症は、ACDの特徴である。これは、インターロイキン（IL）-1β、IL-6、インターフェロン-γ、腫瘍壊死因子-αなどの炎症性サイトカインの増加によって特徴付けられ、赤血球破壊を増加させ、造血幹細胞や前駆細胞を含む様々な細胞の成長や増殖を阻害する30-33。FMTは、IL-6やインターフェロン-γを含む複数のサイトカインの血清濃度を有意に低下させることができ34,35、これは骨髄造血機能の改善に寄与している可能性がある。さらに、Zengらによる動物実験では、若いマウスから採取した健康な腸内細菌叢を老齢マウスに移植すると、骨髄骨髄系細胞から分泌される炎症性サイトカインの濃度が低下し、造血幹細胞の割合と絶対数が有意に増加することが示された36。(2) がん、慢性腎臓病、自己免疫疾患など、ACDのいくつかの根本的な原因は腸内細菌異常と関連しており、FMTによって腸内細菌のバランスを回復させることは、これらの疾患の治療に有益である。(3) フェロポルチンの鉄輸出活性を阻害し、ACDの病態生理学において中心的な役割を果たす肝ホルモンであるヘプシジン32, 33は、常在腸内細菌によって制御されている。
サブグループ解析の結果、高齢者の貧血患者では、慢性疾患による貧血患者よりもWMTの効果がかなり低いことがわかったが、これはおそらく高齢者の骨髄における造血細胞の活性が低下しているためであろう42、 43 いくつかの研究では、下部消化管からWMTを投与された患者の方が治療効果が高いことが示唆 されているが、21, 44 異なる投与経路でWMTを投与されたACD患者間で、血液学的パラメータに対する WMTの効果に有意差は認められなかった。
安全性は、WMTにおけるもう一つの重要な懸念事項である。WMT関連AEの有病率（1.90％）は、以前に報告されたFMT関連AE（19％）に比べ、本研究でははるかに低かった17。さらに、本研究でのAEは軽度であり、対症療法または無治療で緩和された。さらに、貧血のない患者では、血液学的パラメータに対するWMTの有害な影響は検出されなかった。これらの所見は、WMTがACDに対する安全な治療法であることを示している。
本研究では、ACD患者において、WMT後に腸内細菌組成が明らかに変化し、腸内細菌叢の豊かさと多様性が増加する傾向が認められた。さらに、ACD患者で顕著に減少し、HGB濃度と正の相関を示した2つの酪酸産生菌、Lachnospiraceae NK4A136グループとButyricicoccusの相対量は、WMT後に回復した。同様に、これまでの研究で、FMTによりLachnospiraceae NK4A136グループとButyricicoccusが動物モデルで明らかに増加したことが報告されている46-48。Zengらの研究でも、マウスモデルにおいてLachnospiraceaeとButyricicoccusの重要性が証明されている36。これらの結果は、ACD治療のためのWMTにおいてLachnospiraceae NK4A136グループとButyricicoccusが重要であり、新規治療標的となり得ることを示している。さらに、ACD患者では、フマル酸呼吸、亜硝酸アンモニウム化、硝酸塩還元の腸内細菌叢経路がアップレギュレートされていたのに対し、WMT後はフマル酸呼吸経路と亜硝酸アンモニウム化経路がダウンレギュレートされていたことから、これらの微生物経路がACDに寄与しているという考えがさらに支持された。しかし、この2つの経路がACDにどのような影響を及ぼすかについては、さらなる研究が必要である。
この研究の限界も強調しておかなければならない。第一に、ACD患者と健常対照者の人口統計学的特徴は異なっており、このことが腸内細菌叢プロファイルの違いを説明している可能性がある。第二に、いくつかの潜在的交絡因子、特に患者の栄養状態や赤血球造血に影響を与える食事が考慮されていなかった。第3に、サンプル数が少なく追跡期間が短いことを考慮すると、いくつかのサブグループ解析は困難であり、ACDに対するWMTの効果の維持期間は十分に評価されなかった。第四に、糞便サンプルを採取し、糞便DNA保存チューブ（核酸の分解を防ぐための保護液が含まれている）を用いて保存したことから、生きた腸内細菌、特にLachnospiraceae NK4A136グループとButyricicoccusをさらなる研究のために取得することができなかった。従って、糞便サンプルから分離した2つの酪酸産生菌について、サンプル数を多くし、追跡期間を長くし、機能実験を行う臨床研究が必要である。
5 結論
ACD患者では、健常対照群と比較して腸内細菌の組成と機能に違いが見られる。WMTは、腸内細菌組成を変化させ、酪酸産生菌を回復させ、腸内細菌機能を調節することによって作用する、ACDに対する効果的で安全な治療法である。
著者貢献
L-HWとX-XHが研究を計画した。H-JZとW-RCが統計解析を行い、原稿を作成した。X-JL、D-XH、D-JLは実験とデータ収集を行った。TLとLWは知的インプットと監督を行った。H-JZ、W-RC、X-XHは原稿を修正した。
謝辞
本研究は、広東省科学技術局（第2022B1111070006号）および広東省教育局（第2021KCXTD025号）の支援を受けた。
利益相反声明
本投稿に関する利益相反はない。記載されたすべての著者は、International Committee of Medical Journal Editorsの最新のガイドラインに従った著者資格基準を満たしており、すべての著者がこの原稿に同意している。
参考文献
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