セリアック病自己免疫を有する小児におけるLactiplantibacillus plantarumおよびLacticaseibacillus paracaseiサプリメントの糞便メタボロームに対する効果：無作為化二重盲検プラセボ対照臨床試験

2023年7月10日 23:20

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臨床試験論文
Front. 栄養学、2023年7月6日
栄養と微生物
第10巻 - 2023年｜https://doi.org/10.3389/fnut.2023.1183963
この論文は次の研究テーマの一部です
慢性疾患の予防と管理のためのプロバイオティクス、プレバイオティクス、シンバイオティクスの新たな展望
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セリアック病自己免疫を有する小児におけるLactiplantibacillus plantarumおよびLacticaseibacillus paracaseiサプリメントの糞便メタボロームに対する効果：無作為化二重盲検プラセボ対照臨床試験

https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fnut.2023.1183963/full?utm_source=F-NTF&utm_medium=EMLX&utm_campaign=PRD_FEOPS_20170000_ARTICLE

Eliska Jenickova1、Carin Andrén Aronsson2、Anna Mascellani Bergo1、Ondrej Cinek3、Jaroslav Havlik1、Daniel Agardh2*（HEDIMED Investigator Groupを代表して
1チェコ生命科学大学プラハ校食品科学科、チェコ、プラハ
2スウェーデン、マルメ、ルンド大学臨床科学部
3チェコ・プラハ・カレル大学小児科・医療微生物学教室および大学病院モトール（チェコ・プラハ
はじめにセリアック病は、特定のヒト白血球抗原（HLA）分子を持つ人にグルテン不耐症として現れる、生涯にわたる免疫介在性腸疾患である。しかし、遺伝やグルテン摂取以外の要因も、この疾患の引き金となる可能性がある。腸内環境は、こうした潜在的な要因のひとつであり、生涯を通じて影響を受ける可能性があると考えられている。
方法組織トランスグルタミナーゼ自己抗体、すなわちセリアック病自己免疫を有する遺伝的素因のある小児を対象に、Lactiplantibacillus plantarum HEAL9およびLacticaseibacillus paracasei 8700:2の補充が糞便メタボロームに及ぼす影響を検討した。プロバイオティック菌株は、粘膜透過性や免疫調節効果などの有益な特性に基づいて選択された。介入群（n = 40）と対照群（n = 38）は、二重盲検無作為化試験において、プロバイオティクスまたはプラセボを6ヵ月間毎日摂取した。ベースライン時、3ヵ月後、6ヵ月後に糞便サンプルを採取し、1H NMRを用いてメタボロームを分析した。補助的データセットとして16S rRNAシーケンスを組み入れることで、メタボロームデータの解析を補完した。
結果 6ヵ月間の介入期間中、介入群の便中4-ヒドロキシフェニルアセテート濃度は対照群と比較して増加したが、スレオニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、アスパラギン酸、フマル酸濃度は減少した。さらに、グリシン、セリン、スレオニンの代謝経路に注目すべき効果が観察された。
結論この所見から、プロバイオティクスが糞便メタボロームに及ぼす影響は緩やかながら有意であり、主に腸内のタンパク質分解過程に影響を及ぼすことが示唆される。
臨床試験登録： ClinicalTrials.gov, NCT03176095。
はじめに
セリアック病（CD）は、特定のヒト白血球抗原（HLA）ハプロタイプを持つ人にグルテン不耐症として現れる、生涯にわたる免疫介在性腸疾患である(1)。グルテン不耐症は、主に小麦、ライ麦、大麦由来の食事性グルテンに対する反応として、生涯を通じて発症する。グルテン不耐症は、遺伝的にグルテンの摂取が許容されるごく一部の人に発症する。その発症率は世界的に上昇しているようである(2, 3)。
腸内細菌叢がCDの病因、進行、臨床症状に関与している可能性が示唆されている(4-6)。いくつかの研究で、CD患者の腸内細菌叢のバランスが崩れ、腸内細菌叢異常症につながることが報告されている。しかし、確立されたCDを対象とした研究は、因果関係が逆転しやすい-これらの変化が疾患の症状なのか、それとも一因なのかは不明である(6-8)。従って、プロバイオティクスを用いた介入は、疾患発症における細菌の役割を解明するための論理的な戦略の一つである。
プロバイオティクスはCDの補助療法としての可能性が示唆されている(9, 10)。これまでの試験では、主にビフィドバクテリウム属と（以前は）ラクトバチルス属の介入が試験されてきた（11、12）。ビフィドバクテリウム・ブレーベのサプリメントは、炎症性サイトカインを減少させ、SCFAプロファイルに好ましい変化をもたらすことが示唆されている（13）。ほとんどの臨床試験は進行中のCDを対象としているが、腸内環境の変化は診断前から生じている可能性があり、病気の発症に先立ち、予防できる可能性がある(6, 14)。今回の無作為臨床試験、プロバイオティクスによるセリアック病予防（CiPP）試験（15, 16）では、組織トランスグルタミナーゼ自己抗体（tTGA）が持続している、すなわちCD自己免疫のある小児に、ラクチプラス・プランタラムHEAL9とラクチプラス・パラカゼイ8700:2のプロバイオティクス、またはプラセボを6ヵ月間投与した。この介入により末梢リンパ球の免疫反応に変化がみられたが、tTGA値にはプラセボ群と比較して全体的な差はみられなかった(15)。介入により微生物叢に微妙な変化が認められ、主にPrevotella属、Akkermansia属、Bifidobacterium属、Streptococcus属の存在量が増加した(16)。
糞便代謝産物は微生物代謝の主要産物であるが、胆汁や酵素活性、腸管バリア機能、通過時間、宿主の食事などの要因も反映する。核磁気共鳴法（NMR）は、糞便サンプル中に存在する代謝物の分析に使用される標準的な方法の1つである(17)。代謝物フィンガープリンティングは、腸内の分子の概要として微生物叢の機能的能力のスナップショットを提供する(14, 17, 18)。最も研究されている代謝産物は、細菌の糖分解活性の最終産物である短鎖脂肪酸（SCFA）である。特にCDでは、SCFAは制御性T細胞の産生などの免疫調節機能に関与するため、大きな関心を集めている(19)。また、グルテンフリー食を長期間摂取している場合でも、CD患者におけるSCFA産生量の変化が報告された研究もある(20-22)(23)。その他、CDではグルタミンとトリプトファンも代謝量が変化し、免疫系に影響を与える(24, 25)。
本研究の目的は、上記の無作為化二重盲検臨床試験において、糞便メタボロームの組成を記述し、プロバイオティクス介入に伴うその変化を検証することである。
材料と方法
研究参加者とサンプル収集
CiPP試験では、2012年3月から2015年8月の間に登録された、CD自己免疫が進行している2～11歳の小児78人、すなわちスクリーニングで連続した2検体でtTGAが持続陽性と定義された小児を募集した(15)。登録された小児は、CDに関連するHLA遺伝子型（DR3-DQ2/DR3-DQ2、DR3-DQ2/DR4-DQ8、DR4-DQ8/DR4-DQ8、および/またはDR4-DQ8/DR8-DQ4）の保因者から同定された。
参加した小児は無作為化とベースライン診察（0回目）に招待され、3ヵ月後（1回目）と6ヵ月後（2回目）にフォローアップ診察が予定された。参加者はプラセボ群と介入群に1対1の割合で無作為に割り付けられた。登録された78人の小児（プラセボ群：n=38、介入群：n=40）（表1に特徴を示す）のうち、63人（81％）が3回の診察すべてに糞便サンプルを提供した。
表1
表1. 試験参加者のベースライン特性。
試験製品は、以前はLactobacillus plantarumとして分類されていたLactiplantibacillus plantarum HEAL9と、以前はLactobacillus paracaseiとして分類されていたLacticaseibacillus paracasei 8700:2の等量混合物であり、総菌量は1×1010 CFU/袋で、マルトデキストリン（1.0 g）であった。プラセボはマルトデキストリンのみであった。2つの乳酸菌株の組み合わせは、それぞれの生理作用の違いから選択された。すなわち、Lactiplantibacillus plantarum HEAL9は粘膜の透過性を標的としており、Lactocaseibacillus paracasei 8700:2は免疫系を標的としている(26, 27)。登録された子どもたちは全員、試験期間中、グルテンを含む通常の食事に従った。
便サンプルの採取は、研究参加者の介護者が自宅で行った。サンプルはラボに運ばれるまで-20℃で保存され、分析まで-80℃で保管された。糞便マイクロバイオームは、16S rDNA配列決定法を用いて以前に解析された(16)。得られたシーケンスデータは、DADA2パイプライン(28)とnon-redundant Silvaデータベースバージョン138(29)を用いて本研究用に再処理した。
糞便メタボローム
糞便アリコートはJaimesら(30)に従って調製した。使用した化学物質および試薬はすべて分析グレードで、Sigma-Aldrich（Merck, Darmstadt, DE）から購入した。1H NMRスペクトルは、プロトン周波数500.18 MHzで動作するz軸勾配付き広帯域フッ素観測SmartProbeTM (Bruker BioSpin GmbH, Rheinstetten, Germany)を装備したBruker Avance III HDスペクトロメーターで記録した。すべてのサンプルは、TopSpin 3.6.4（ブルカー・バイオスピン社、ラインシュテッテン、ドイツ）で手動で位相調整し、0.0ppmの内部標準（3-(トリメチルシリル)プロピオン酸-2,2,3,3-d4酸ナトリウム塩）に較正した、プリサチュレーション付きの1D NOESYパルスシーケンスを使用して取得した。スペクトルの前処理は、MATLAB® R2020a（MathWorks, Natick, MA, USA）の下で、ユーザー定義セグメントでのマルチポイントベースライン補正からなる社内スクリプトで行い、すべてのスペクトルで同じ前処理が行われるようにした。δ0.5～9.0ppm（残留水領域δ5.1～4.6ppmを除く）のスペクトルは、定義されたバケットに縮小されました。各ビンは、理想的に純粋で、明確で、定量的なスピン系またはスピン系の一部を表し、ほとんどの場合、各代謝物ごとに1つのビンがあります。ビンの範囲は、ソフトウェア Chenomx ver. 8.6を使用し、内蔵スペクトルライブラリ、自社データベース、および公表されている注釈付き便スペクトル(30-33)を使用して、スペクトルのサブセットを注釈した後にビンの範囲を選択した。ワークフローの詳細を補足図1に示す。統計処理のために、バケットは確率的商正規化(34)を用いて正規化した。
統計解析と多成分解析
MATLAB® R2020a 環境下で PLS-Toolbox 8.9 (Eigenvector Research, Wenatchee, WA, USA) に実装されている主成分分析 (PCA) アルゴリズムを使用して、注釈付きピークと未知ピークのバケットを含むメタボロームを評価しました。PCAは、スペクトルで同定されたすべての注釈付きピークと未知ピークの濃度を用いて実行され、他のすべてのテストは注釈付き特徴のデータのみを用いて実行された。線形混合効果モデルを構築し、3 回の訪問期間中の個々の代謝物量の変化を特徴付けた。モデルは、切片のみを変化させるランダム効果として個人を含み、固定効果は診療所訪問と介入群であった。クリニックの受診と介入との交互作用項は、食事介入の時間的影響を示す目的で興味深いと考えられた。分析は、R v. 4.2.1 (36)のパッケージ'lmerTest' v. 3.1-3 (35)を用いて実施した。さらに、ウィルコクソン和順位検定およびウィルコクソン符号順位和検定を、3回の来院をすべて完了した被験者について、各来院における介入間の一対比較および各介入の来院内比較に適用した。糞便中メタボロームと糞便中マイクロバイオームとの相関は、サンプルの40％以上で検出されたファミリー分類学的レベルを用いて、ρ＞｜0.5｜を考慮したスピアマンの順位相関検定を用いて検定した；相関は、クラスタリングにユークリッド距離を用いてヒートマップとして可視化した。メタボロームと16S rRNAマイクロバイオームプロファイルの関連は、グループや来院に関係なく、全サンプルのメタボローム-マイクロバイオームペアデータセットで解析した。すべての来院時（来院0、来院1、来院2）に糞便サンプルを提供した小児のサンプルのみをウィルコクソン検定に使用した。除外後、189検体（n=63）が比較された（介入群、n=32；プラセボ群、n=31）。他のすべての分析では、すべての糞便サンプルが含まれた（訪問0時の介入群、n=38；訪問1時の介入群、n=37；訪問2時の介入群、n=35；訪問0時のプラセボ群、n=36；訪問1時のプラセボ群、n=34；訪問2時のプラセボ群、n=36）。さらに、生理学的パターンを明らかにするために、モデル生物として腸内細菌叢全体の代理として大腸菌属を用い、MetaboAnalyst 5.0とKEGG代謝ライブラリーを用いて、visit 2における群間のパスウェイ解析を行った（37, 38）。解析は、グローバル検定によるパスウェイ内での代謝物の過剰発現、および相対的な中心性（relative betweenness centrality）によるパスウェイの機能に対する変化した代謝物の影響を考慮して行った。
結果
プロバイオティクス投与によるメタボロームの変化
主に短鎖脂肪酸、分岐鎖脂肪酸、アミノ酸、糖の分子を対象としたセミターゲットアプローチにより、46種類の代謝物が同定された。最も多く検出された代謝物は、プロピレングリコール、酢酸、酪酸、ロイシン、アラニンであった。さらに、145の未知のスペクトル特徴が明らかになった（補足表1）。PCAに基づく探索的データアプローチを最初のステップとして使用し、研究を通じて個体の進行状況を評価した。プラセボ群か介入群かに基づく被験者間の共通傾向や明確な区別は、ベースライン、visit 1、visit 2では観察されなかった（図1；補足図2A-C）。そこで、被験者ごとに訪問0時に登録された濃度を差し引いた後、訪問1時と訪問2時の被験者を示すPCAモデルを検討し、被験者間で自然に生じる違いによって隠されている可能性のある傾向を強調した。共通の傾向は観察されなかった（補足図2D）。一方、マルチレベルモデリングでは、時間（来院）と介入およびプラセボとの相互作用が、8つの糞便代謝物と有意な関連（p＜0.05）を示した（図2）。これらには、スレオニン（p＝6.9×10-5、図2A）、メチオニン（p＝0.015、図2B）、ロイシン（p＝0.022、図2C）、バリン（p＝0. 027、図2D）、イソロイシン（p = 0.043、図2E）、フェニルアラニン（p = 0.046、図2F）、およびわずかにフマル酸（p = 0.049、図2G）であり、プラセボ群では正の傾きを示した（図2）。反対に、4-ヒドロキシフェニルアセテート（p = 0.001、図2H）は介入群で増加した。
図1
図1. Lactiplantibacillus plantarum HEAL9とLacticaseibacillus paracasei 8700:2の混合物（介入）またはプラセボを摂取した試験参加者間の糞便代謝物の主成分分析。対になったデータは、ベースラインから3ヵ月後および6ヵ月後に予定されている追跡調査訪問に向かって矢印で結ばれている。
図2
図2. Lactiplantibacillus plantarum HEAL9とLacticaseibacillus paracasei 8700:2の混合物（介入）またはプラセボを投与された参加者における、試験開始時（visit 0）から3ヵ月後（visit 1）および6ヵ月後（visit 2）までの8つの代謝物の存在量の変化の予測。食事介入の時間的影響を示す線形混合効果モデルにより同定された有意な代謝物：（A）スレオニン、（B）メチオニン、（C）ロイシン、（D）バリン、（E）イソロイシン、（F）フェニルアラニン、（G）フマル酸、および（H）4-ヒドロキシフェニル酢酸。生のp値およびBenjamini-Hochberg補正後に調整したp値を示す。
線形混合効果モデルに加え、単変量統計も各訪問について別々に一対比較を行った。このアプローチにより、ベースラインにおけるフマル酸産生量の差が明らかになり、介入群で高く（p = 0.021）、これは治療群における異常値によるものであった。したがって、メタボローム・プロファイルの点では、2つのグループは同等であると考えられた。プロバイオティクスサプリメントを摂取したドナーの便組成は、プラセボ群と比較して、3ヵ月時点でエタノール（p = 0.017）とグリセロール（p = 0.046）が低かった。6ヵ月後、プロバイオティクスの補充は4-ヒドロキシフェニル酢酸（p = 0.019、図3A）の有意な増加を引き起こしたが、アスパラギン酸（p = 0.037、図3B）、乳酸（p = 0.027、図3C）、スレオニン（p = 0.001、図3D）はベースラインと比較して減少した。
図3
図3. ベースライン時（visit 0）および3ヵ月後（visit 1）および6ヵ月後（visit 2）に予定された追跡調査時に、Lactiplantibacillus plantarum HEAL9とLacticaseibacillus paracasei 8700:2の混合物（介入）またはプラセボ（偽薬）を投与された研究参加者の糞便中の（A）4-ヒドロキシフェニルアセテート、（B）アスパラギン酸、（C）乳酸およびスレオニン（D）の存在量の変化。アスタリスクは有意差を示す *p<0.05、**p<0.01はBenjamini-Hochberg補正適用前、補正後は有意な変化は記録されなかった。
経路解析の結果、6つの代謝経路で枯渇が見られた；グリシン、セリン、スレオニン代謝（p = 0.013）；シアノアミノ酸代謝（p = 0.024）；メタン代謝（p = 0.025）；ピルビン酸代謝（p = 0.027）；システインとメチオニン代謝（p = 0.033）；ニコチン酸とニコチン酸アミド代謝（p = 0.049）。糞便サンプルの代謝経路の変化を補足表2および補足図3に示す。
メタボロームとマイクロバイオームとの関連
同定された科の相対存在量と注釈付き代謝産物の濃度から、Pasteurellaceae、Monoglobaceae、Ruminococcaceae、Lachnospiraceae、Carnobacteriaceae、Aerococcaceaeの各科はグルコースなどの糖分解代謝産物と正の相関があり、タンパク質分解代謝産物とは負の相関があることが明らかになった（図4）。特に興味深いのはPasteurellaceae科とグルコースとの逆相関であった（ρ = 0.58, p < 2.2 × 10-16; Figure 5A）。リケネラ科、オシロスピラ科、クリステンセネラ科、オシロスピラ科UCG-010、オシロスピラ科UCG-011、マリニフィラ科、バルネシエラ科、アッケマンソウ科、Eubacterium coprostanoligenes group、Anaerovoracaceae、 Defluviitaleaceae、Peptococcaceae、Tannerellaceae、Desulfovibrionaceaeであり、これらはフェニルアセテートなどのタンパク質分解代謝産物が豊富な環境と正の相関を示し、糖分解代謝産物とは負の相関を示した（図4）。リッケネラ科とグルコースの間には逆相関が観察された（ρ = -0.58, p < 2.2 × 10-16; 図5B）。リケネラ科の存在量はグルコースの増加とともに指数関数的に減少した。一方、リッケネラ科は代謝産物イソバレレートと正の相関があった（ρ = 0.52, p < 2.2 × 10-16; Figure 5C）。乳酸菌科は有意な相関を示さなかった。
図4
図4. 受診および介入に関係なく、すべての研究検体における家族レベルの腸内細菌叢存在量と糞便代謝産物との関連を示す相関ヒートマップ。
図5
図5. 家族レベルでの腸内細菌叢存在量と、受診および介入にかかわらずすべての研究サンプルにおける糞便代謝産物との間のスピアマンの順位相関プロット。(A）パスツレラ科とグルコース間の線形回帰。(B）リケネラ科とグルコースの間の線形回帰。(C）リケネラ科とイソバレレートとの間の線形回帰。ρ>｜0.5｜の相関を示す。
考察
本研究は、無作為化二重盲検プラセボ対照臨床試験に参加したCD自己免疫症の小児にLactiplantibacillus plantarum HEAL9とLacticaseibacillus paracasei 8700:2を6ヶ月間介入させたところ、プラセボ群と比較して糞便メタボローム中のスレオニンが有意に減少し、4-ヒドロキシフェニル酢酸が有意に増加したことを1H NMRで測定し、線形混合効果モデルを用いて決定した。バリン、ロイシン、イソロイシン、アスパラギン酸、メチオニン、フェニルアラニンなどの他のアミノ酸も、フマル酸とともに介入後に減少する傾向がみられた。これらの変化は、多重比較の調整後ではなかったが、境界的に有意であった。
これらの代謝物はすべてタンパク質の分解に関連しており、腸内のタンパク質分解発酵への影響を示唆している。消化管では、糖類分解発酵とタンパク質分解発酵の間に微妙な均衡があり、この均衡の乱れが様々な疾患状態と関連している可能性がある(39, 40)。一般にタンパク質分解発酵はタンパク質を生成し、ペプチドはアミノ酸に分解され、主に分岐鎖脂肪酸やポリアミンなどが生成される(41)。一方、糖類分解発酵は食物繊維を単純炭水化物に分解し、主にSCFAやその他の有機酸を生成する(42)。しかしながら、我々の研究で観察されたタンパク質分解経路の抑制は、糖分解発酵の増加には結びつかなかった。
タンパク質分解は、組織損傷が起こり、細胞や細胞滲出液が腸管内腔に放出され、細菌による加水分解を受けるような腸炎などの疾患状態において増加することが以前に示されている(43)。Di Cagnoらによる研究(44)では、治療を受けたCD児と健常対照児のメタボロームを比較したところ、CD児の便にはアミノ酸が多く含まれていた。同様の結果はDe Angelis (45)でも報告されている。このように考えると、今回の結果は、プロバイオティクスの予防的な性質と、微生物の代謝をバランスのとれた状態に形成する潜在的な能力を示唆しているのかもしれない。
スレオニン濃度の減少は、メタボロームにおける主要な変化であった。ヒトの消化器官によるスレオニン合成には限界があるが、腸内細菌叢のメンバーによってグルコースとアスパラギン酸から合成される可能性がある(46)。さらに、アスパラギン酸レベルの減少が見られ、グルコースレベルの変化は観察されなかったが、この所見はこの経路の制御を示唆している。さらに、パスウェイ解析の結果、スレオニン代謝への影響が確認された。以前の研究で、16S rDNA配列決定法を用いてこのサンプルセットを調べたところ、Prevotella属、Akkermansia属、Streptococcus属、Bifidobacterium属の存在量が増加していた(16)。これらの属は、スレオニンの産生という点ではスレオニンとの重要な関連性を欠くが、Akkermansiaは粘液の顕著な分解者である(47)。粘液は腸の保護膜であり、トレオニンはムチンタンパク質のコアに非常に多く含まれるアミノ酸である（48, 49）。したがって、アッケマンソウは粘液を分解することによって、間接的に腸内のスレオニンレベルに影響を与える可能性がある。しかし、この仮説に基づけばスレオニンレベルの増加が予想されるが、減少が観察された。粘液分解の増加はその物理的破壊と関連しているので、これは腸内状態がより健康であることの徴候かもしれない(50)。この知見に関する今後の研究が大いに望まれる。
介入後に増加した唯一の化合物である4-ヒドロキシフェニルアセテートは、チロシンの大腸微生物異化物である(51)。このことからも、チロシンの代謝産物のタンパク質分解発酵と分解に対する影響が示唆される。4-ヒドロキシフェニルアセテート自体は、肝保護作用や抗酸化作用など、腸内で生物学的効果を示す可能性がある(52)。4-ヒドロキシフェニルアセテートは、同試験における変化した属やセリアック病そのものと有意な直接的関連はないようである。
メタボロームの変化に加えて、本研究では、病態に関係なくすべてのデータを用いて、微生物叢と代謝産物との間に興味深い相関関係が示された。ヒトの腸内微生物集団は、Ruminococcae属、Prevotella属、Bacteroides属を含むいくつかのコア分類群によって特徴づけられる(53)。最初の2つの属は繊維の分解や糖分解経路と関連しており、一方バクテロイデス属はタンパク質分解経路と関連している。植物性の食事はプレボテラ属とルミノコッカス属の濃度が高く、肉食はバクテロイデス属の濃度が高いというように、食事摂取との関連は明らかである(54)。さらに、バクテロイデスは炎症状態で増加する(55)。相関分析では、グルコースのような糖分解代謝物とRuminococcaceaeのような科との強い相関が検出されたが、Rikenellaceaeのような他の科はアミノ酸やアミノ酸分解産物との相関を示した。このクラスタリングは、前述のように異なる分類群の代謝能力と非常によく一致しており、2つの方法の相補性を示している。
結論
Lactiplantibacillus plantarum HEAL9とLacticaseibacillus paracasei 8700:2の組み合わせは、6ヵ月間の介入後、遺伝的にCDになりやすい子供の便の代謝産物のレベルに、わずかではあるが有意な変化を示した。スレオニンは腸粘液と密接に関連するアミノ酸であるため、スレオニン濃度の低下が観察されたことも注目に値する。スレオニンに関連する代謝経路は、プロバイオティクスの介入によって影響を受けるようである。
データの利用可能性
本研究で発表されたデータセットはオンラインリポジトリで見ることができる。リポジトリ名とアクセッション番号は以下の通り： https://www.ncbi.nlm.nih.gov/, PRJNA732664.
倫理声明
ヒトを対象とした研究は、ルンド大学医学部倫理委員会（Dnr 2011/335; Dnr 2021-04470）により審査・承認された。本研究への参加については、参加者の法的保護者／近親者から書面によるインフォームド・コンセントを得た。
著者貢献
EJが原稿を起草し、データを解釈し、投稿までのすべての修正を行った。CAAは、試料採取と研究参加者からのデータ収集の調整を行った。EJとJHはメタボローム解析を行った。OCは微生物学的解析を行い、原稿の校閲と修正を行った。AMBは統計解析を行った。DAが本試験の治験責任医師であり、試験デザインを担当した。DAとJHは、本研究のコンセプトを立案し、解析結果の発表に助言し、データを解釈し、原稿を検討・修正し、重要な知的内容について批評的評価を行った。すべての著者が論文に貢献し、提出されたバージョンを承認した。
資金提供
本研究は、欧州連合（EU）のHorizon 2020 Research and Innovation Programme（ホライズン2020研究・イノベーションプログラム）より、助成金契約番号：874864 HEDIMEDの助成を受けた。本書は著者の見解のみを反映したものであり、欧州委員会は本書に含まれる情報のいかなる利用についても責任を負わない。本研究は、Stiftelsen Samariten、FoU Region Skåne、SUS fonder、Swedish Celiac Disease Foundation、Swedish Research Council、Grant/Award No.2018-02553、Crafoords Stiftelse、Dr. Per Håkanssons Stiftelse、Probi ABの助成を受けた。OCは、国立ウイルス学・細菌学研究所（Programme EXCELES、ID Project No.LX22NPO5103）-欧州連合（EU）-次世代EU（Next Generation EU）から資金提供を受けた。本研究は、METROFOOD-CZ研究基盤プロジェクト（MEYS助成金番号：LM2018100）の支援も受けた。
利益相反
DA氏は臨床試験結果に基づく特許出願において発明者として記載されているが、特許に関するすべての法的権利をProbi AB社に譲渡した。Probi ABは、本臨床試験のための試験材料（活性製品およびプラセボ製品）を開発・提供し、また試験材料の分析にかかるわずかな費用を財政的に支援した。著者らはいずれもProbi ABに雇用されておらず、本試験に関連してProbi ABから著者らに給与やコンサルタント料などが支払われたことはない。
発行者注
本論文で表明されたすべての主張は、著者個人のものであり、必ずしも所属団体、出版社、編集者、査読者の主張を代表するものではない。本論文で評価される可能性のあるいかなる製品、またはその製造元が主張する可能性のある主張も、出版社によって保証または支持されるものではない。
補足資料
本論文の補足資料は、https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fnut.2023.1183963/full#supplementary-material に掲載されている。
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キーワード：セリアック病、腸内メタボローム、Lactiplantibacillus plantarum、Lacticaseibacillus paracasei、NMR、プロバイオティクス
引用 Jenickova E, Andrén Aronsson C, Mascellani Bergo A, Cinek O, Havlik J and Agardh D（2023）セリアック病自己免疫の小児における糞便メタボロームに対するLactiplantibacillus plantarumおよびLacticaseibacillus paracaseiサプリメントの効果：無作為化二重盲検プラセボ対照臨床試験。Front. doi: 10.3389/fnut.2023.1183963.
受理された： 10 March 2023; Accepted： 08 June 2023；
発行：2023年07月06日
編集者
アルン・K・B、クライスト大学、インド
査読者
ルカ・ラギ（イタリア、ボローニャ大学
Yongjun Xia, 上海科学技術大学, 中国
Copyright © 2023 Jenickova, Andrén Aronsson, Mascellani Bergo, Cinek, Havlik and Agardh. これは、クリエイティブ・コモンズ表示ライセンス（CC BY）の条件の下で配布されるオープンアクセス記事です。原著者および著作権者のクレジットを明記し、学術的に認められている慣行に従って本誌の原著を引用することを条件に、他のフォーラムでの使用、配布、複製を許可する。これらの条件に従わない使用、配布、複製は許可されない。
*文責 Daniel Agardh, daniel.agardh@med.lu.se
免責事項：本論文で表明されたすべての主張は、あくまで著者個人のものであり、必ずしも所属団体、出版社、編集者、査読者の主張を代表するものではない。本記事で評価される可能性のあるいかなる製品、またはその製造元が主張する可能性のあるいかなる主張も、出版社によって保証または支持されるものではありません。
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